肌钙蛋白I2作为核受体辅活化子的鉴定

发布时间：2020-05-23 00:27

【摘要】：核受体，又叫核受体超家族(nuclear receptor superfamily)属于配体活化的转录因子，广泛参与了包括胚胎发育、细胞分化和内环境稳定等生理过程。大多数核受体具有相似的结构，其C端含保守的具有重要功能的配体结合结构域(ligand bindingdomain，LBD)，，在这一部位还含有配体依赖的激活功能结构域AF-2(activation function2)，在介导受体的二聚化、核定位、与辅活化子的结合方面起着重要的作用。核受体辅活化子(coactivator)是目前核受体研究的热点和重点，它作为核受体和基础转录复合物间的桥梁分子发挥作用并调谐了核受体的转录激活功能。人雌激素受体相关受体α_1(human estrogen receptor-related receptor α 1，hERR α 1)是核受体超家族中的孤儿受体(orphan receptor)成员，目前包括我们在内的多家实验室根据自身的研究成果都推测ERR α 1是一种新发现的与乳腺癌有密切关系的核受体，但目前对其具体的调控机理尚未弄清。为进一步深入研究“孤儿”受体ERR α 1与乳腺癌的关系，弄清ERR α 1参与基因表达调控的详细机理特别是核受体辅活化子在其中的作用，我们进行了如下的研究： 1、利用基于酵母Ga14转录因子的双杂交系统，以ERR α1的LBD为“诱饵”筛选了人乳腺组织cDNA文库。快速骨骼肌型肌钙蛋白I(fast skeletal muscletroponin I，troponin 12，TNNI2)与包括SRC-1在内的一些已知辅活化子蛋白质一起被筛选出来。 2、应用酵母双杂交技术研究TNNI2与多种核受体的相互作用。结果表明，TNNI2与PR、TR和RXR等多种核受体存在配体依赖的相互作用；与mERR α和hERRα 1等“孤儿”核受体的相互作用为配体非依赖，其中TNNI2与hERRα 1的相互作用最强。并且，TNNI2与核受体的相互作用依赖于核受体AF-2功能性结构域的完整性。 3、在哺乳细胞瞬时共转染实验中，TNNI2显示了对核受体ER、ERRα 1、SF1和ARP1反式激活功能的辅助活化作用，但单独的TNN2并不显著改变虫荧光素酶(1uciferase)报告基因的转录效率。这些结果证实了TNNI2具有核受体辅活化子的功能。第三军医大学博士学位论文 4.研究体外蛋白质相互作用的GST捕获实验也证实了TNN12与ERR Ql的直接相互作用。 5.在证实了TNNIZ与核受体存在相互作用并能辅助活化核受体的反式激活作用的情况下，我们进一步采用缺失突变技术，利用酵母双杂交实验证明了TNN12与核受体的相互作用定位于TNN12蛋白的1一128氨基酸残基，这一区域包括TNN12 的氨基末端、抑制区和LXXLL模体(motif)即NR盒。哺乳细胞瞬时共转染实验也证实，TNN121一128缺失突变体能够通过与野生型TNN12竞争核受体的结合，显示其作为TNN12负显性抑制剂的功能。这一结果进一步证实1一128氨基酸区域确实是TNN12的核受体结合结构域。以上的研究充分证明了TNN12与许多其它辅活化子一样，以配体依赖(对类固醇激素受体而言)或非依赖(对孤儿受体而言)的方式与核受体功能性AF一2结构域相互作用，并增强多种核受体介导的转录作用，TNNIZ与核受体的相互作用定位于TNN12 蛋白1一128氨基酸。本研究证实，TNNIZ是一种新的通用核受体辅活化子。我们通过一系列研究首次揭示了INN12除介导和调节脊椎动物横纹肌收缩及参与抑制新血管的形成外，尚存在作为核受体辅活化子参与基因表达调控的新功能。这项研究发掘了INNIZ新的生物学功能，有助于我们对TNN12生物学功能的全面认识，并加深了人们对核受体包括ERR Ql基因表达调控机制的认识。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R341

【参考文献】