丙型肝炎病毒NS3区基因变异和T细胞免疫的研究

发布时间：2020-05-29 21:54

【摘要】：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是非甲非乙型肝炎的主要致病原，全世界至少有1亿7千万患者。HCV感染者预后差，大多数会发展成慢性肝炎、肝硬化和肝癌。研究HCV的发病机理和研制出有效的疫苗是丙型肝炎研究中亟待解决的问题。为此本课题主要从以下两个方面进行研究：一是研究HCV NS3区基因变异和细胞毒T细胞表位改变在HCV感染中的作用；二是寻找相对保守的T细胞表位和初步研究基因免疫在HCV感染防治中得作用，为丙型肝炎的防治打下基础。实验包括以下五个部分： 1、丙型肝炎病毒NS3区C末端基因变异的动态研究动态测定了2名慢性HCV感染者(编号291和681)5年3个时间点和3年2个时间点HCV NS3区C末端基因序列和1例HCV转阴的患者(编号681)的序列，每个时间点测定5个克隆，共测定30个克隆。研究发现HCV NS3区C末端基因变异有以下特点：(1)患者所测序列中，核苷酸序列高度保守，，序列中核苷酸序列完全一致的大于89％。与参考序列比同源性大于92％。同一个体同一个时间点核苷酸同源性大于96％。(2)氨基酸序列也高度保守，同源性与核苷酸基本一致，无插入、缺失等突变，仅在一个序列中出现一个终止密码。丝氨酸蛋白酶的切割位点也未发生改变，说明丙型肝炎病毒NS3区基因在病毒加工和复制中的重要性。(3)进化树分析，291患者克隆分布呈相互交织状态，无明显的优势克隆存在，941患者的序列体现优势克隆逐渐转化的趋势。 2、丙型肝炎病毒NS3区C末端CTL应答的研究动态分析丙型肝炎病毒NS3蛋白C末端细胞毒T细胞表位的长期演变规律。用血清学方法检测患者的HLA分型，并以此为依据，预测了HLA-A2和HLA-A11限制的CTL表位，分析了CTL表位的改变。合成了一个预测的HLA-A11限制的表位IILTHPVTK，用T细胞增殖实验和ELISPOT实验验证序列是否为CTL识别的表位。结果表明：(1)预测的NS3蛋白C末端HLA-A2限制的细胞毒T细胞表位有22个，HLA-A11限制的细胞毒T细胞表位有11个。(2)5年和3年内预测的HLA-A2和HLA-A11限制的CTL表位在2例慢性患者都未发生明显改变。HCV转阴患者的序列中，HLA-A2限
【图文】：

测序,载体

图2螺旋酶基因的扩增二、NS3区序列测定和分析将阳性菌落扩增和纯化后，用载体上引物进行测序。结果见图2，图3，图4。GCGCCAAPTGCATCCIGGGGACCTTCASACCTGCGATTGLGACDAAGKGCGAGCGATCCSGAGETGCATCACGGCCTACTCCCAACAGACCCGG喘CTTA1TAY5QQTRGLATCGCTAGCCTCACAGGCCGAGACAAGAACCAG1A5LTGRDKNQGTTCAAGTGGTCTCCACCGCAACAC
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1999
【分类号】：R392

【参考文献】