孤啡肽受体和大麻受体参与脊髓伤害性信息调节的细胞和分子药理学机制—薄片膜片钳全细胞记录技术

发布时间：2020-05-30 10:14

【摘要】： 孤啡肽受体和大麻受体是新近发现的两类G蛋白耦联型受体(Mollereau et al.,1994;Lachowicz et al.,1995;Pertwee,1997,1998)。随着受体的克隆，其内源性配体也相继被发现，它们分别是Nociceptin(又名Orphanin FQ)和Anandamide(N-arachidonoylethanolamide)。已经有研究表明这两类受体具有非常相似的作用，表现为抑制腺苷酸环化酶，，开启多种类型神经元(如PAG，海马等)上的钾通道和抑制大鼠海马和背根节神经元上的钙电流。免疫组织化学和原位分子杂交实验结果显示这两类受体及其配体在脊髓背角浅层均有大量的分布(Anton et al.,1996;Farquhar-Smith et al.,2000)。行为学研究也观察到鞘内注入Nociceptin和大麻受体的激动剂如WIN 55,212-2(WIN-2)、Anandamide等均可在多种痛模型上(包括急性痛、持续性痛和慢性痛模型等)产生明显的抗伤害性作用(see Mogil ＆ Pasternak,2001;Pertwee,2001 for review)，由此可见Nociceptin—孤啡肽受体系统和Anandamide—大麻受体系统构成了内源性镇痛系统的重要组成部分。但是关于孤啡肽受体和大麻受体在脊髓水平参与伤害性信息传递的细胞和分子机制仍不清楚，大量的实验证第四军医大学博士学位论文明脊髓背角胶状质（Substania gelatinos’ SG）在将伤害性信息从外周向中枢传递的过程中起着重要的作用。故滩究首先应用脊髓薄片膜片钳全细胞记录技术观察了在电压钳制下孤啡肽受体的内源性配体Nociceptin对脊髓背角 SG神经元膜电流的影响作用以及其对脊髓背角兴奋性和抑制性突触传递的作用，其次观察了nand．－－－－－－－－－－de对脊髓背角SG神经元膜电流的影响作用以及其对脊髓背角兴奋性突触传递的作用并将其作用与Capsaicin进行了比较研究。本论文包括以下几个方面的研究内容： 1．Nociceptin在电压钳制下对成年大鼠脊髓背角SG神经元膜电流的影响在钳制电压为刁0 mV的情况下，灌流给子 Nociceptin可以诱致脊髓背角 SG神经元产生一外向电流并且呈浓度依赖性，它的 ECS。值为 0二3卜M，Hill 系数为 l．5。l卜M Nociceptin诱致的卜向电流的平均幅度为 26土 5 pA （一 68X并且其翻转电位与钾离子的平衡电位基本相近…－4X在给予Nociceptin 之前灌流不同钾通道的阻断剂如 BaCI（100卜M；n－4）、4aminopyridine 卜AP；IInM；n一 4）和Tetrae山ylammoniuxn（TEA； 5 InM；n一 4），结果发现 Nociceptin诱致的外向电流可以被时”大大地抑制门制率为 56 i 8％），而不受 4AP和 TEA的影响。灌流 m（Tetrodotoxm；lqM； n＝4）和纳洛酮（阿片类受体的非特异性桔抗剂；l卜＊ n＝4）均对Nociceptin诱致的外向电流也不产生任何作用。而当检测几种与孤啡肽受体有关的抑制剂的作用时发现：Nocistatin（合成Nociceptin前体的产物，lpM）和CompB（孤啡肽受体的非肽类桔抗剂，lpM）均对 Nociceptin诱致的外向电流产生了不同程度的抑制，它们的抑制率分别为 18 土 4％（n－6）和 64土 10％＊－7），而这两种物质本身不弓1起 SG神经元膜电流的变化；而以往被公认为是孤啡肽受体桔抗剂的［Phe’叭CH二－帆Gghnociceptm－（l－13）－NH＊（Nociceptin的千生物； 1卜M）本身就可以引起SG神经元产生一外向电流，在这一外向电流的狙上 NocicCptin引起的电流可以被大大地抑制，其抑制率为 56％切－8X 从上述结果我们可以看出Nocice加通过作用于SG神经元上的孤啡肽受体来激活内向整流性钾通道从而使该神经元产生超级化；这个超级化的作用可能参与了Nocic叩tin介导的抗伤害性作用。 2 第四军医大学博士学位论文 2．NOOSOO＊h口对传向脊髓背角SG神经元的兴奋性和抑制性突触传递的影响在i己录电极内液中加入 GDP书S、艳离子和 TEA（主要用于阻断突触后的 G蛋白和钾通道的作用）的状况下，Nociceptin诱致的外向电流可以完全被阻断。以下的实验都是在Nociceptin对SG神经元的超级化效应被完全阻断的情况下进行的。在钳制电压为刁0 mV的状况下；NocicePtin可以明显地抑制刺激AS纤维和C纤维诱发的单突触的兴奋。吐突触后电流（excitatory postsyn＠tic currents，EPSCs的幅度，并且其对 C纤维 EPSC抑制的程度＊制率为扣土6％，n一比）要强于对AS纤维EPSC的抑制（4制率为30土5％， n一 23；P＜0．05）。Nociceptin对C纤维和A6纤维EPSC的抑末作用在0．l－imp 的浓度范围内呈明显的浓度依赖性，
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R329

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