树突状细胞TLR9信号途径的调控及其应用研究

发布时间：2020-06-21 00:56

【摘要】：1.TLR9通路对树突状细胞表面CD40表达的调控机制研究树突状细胞(dendritic cells, DCs)是目前所知体内功能最强的抗原递呈细胞,在启动和协调天然免疫和获得性免疫中发挥重要作用。微生物来源的刺激物如CpG可以刺激DCs使其表面异常地高表达CD40,进而参与多种疾病的发生,尤其是自身免疫性疾病和炎症性疾病。由于CD40和DCs都在这些疾病中的发挥重要作用,所以研究CpG诱导的DCs表面CD40表达的机制尤为重要。本研究中,我们发现B类CpG可以有效地诱导小鼠骨髓来源DCs上CD40的表达。基于这一发现,我们继续对这类CpG诱导DCs表面CD40表达的分子机制进行了研究。通过使用特异性抑制剂,我们证明MAPKs家族中的JNK和p38 MAPK(而不是ERK)和转录因子NF-κB参与了由CpG诱导的DCs表面CD40的表达。另外,通过RNA干扰技术,我们发现IRF8是调控CD40表达的重要的转录因子,它不仅能够影响诱导型CD40的表达,还能影响组成型CD40的表达。通过上调miRNA-146a可以通过靶向作用于TLR9通路的接头蛋白TRAF6和IRAKI来负调控CD40的表达。综上,我们的研究阐明了CpG诱导CD40表达和DCs成熟的分子机制。2.小分子化合物Chaetoglobosin F通过TLR9信号通路调控树突状细胞的免疫功能细胞松弛素F (Chaetoglobosin F, Cha F)是球毛壳菌IFB-E019固体培养物的乙酸乙酯提取物,是一种新型的小分子化合物。DCs是功能最强的抗原递呈细胞,所以成为调控过度免疫反应的靶细胞。DCs中的TLR9对CpG-DNA的识别是自身免疫性疾病发生的重要环节,然而Cha F对CpG诱导的DCs的成熟和免疫调节功能尚未有人研究。本文研究了小分子化合物ChaF对小鼠骨髓来源DCs的作用,我们发现Cha F可以抑制由CpG诱导的DCs的成熟和功能,主要表现在：抑制其表面分子(CD40, CD80, CD86, MHC-II和CCR7)的表达；降低细胞因子和趋化因子(IL12和CXCL-10)的产生；抑制DCs活化T细胞增殖的能力；降低DCs的趋化能力。另外,Cha F可以抑制MAPKs家族中JNK和p38MAPK(而不是ERK)的活化,还可以抑制转录因子NF-κB和STAT的活化及核转入。有趣的是,我们证明Cha F还可以抑制CpG诱导的TLR9的表达。综上,我们的研究证明Cha F具有新颖的免疫药理学功能,尤其是对CpG活化的DCs, Cha F的这种免疫抑制特性可能会为DCs相关的自身免疫性和／或炎症性疾病提供有用的理论依据和应用价值。3.一种新型的小分子化合物FC-99调控TLRs诱导的DCs的活化并能缓解MRL/lpr小鼠的狼疮样综合征TLR3、TLR4和TLR9都组成型地表达于小鼠的mDCs,这三条TLRs信号通路的活化参与了自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)的病理过程。因此,调控TLRs信号通路可以成为调控DCs过度活化的有效手段,进而调控炎症性自身免疫性疾病。本研究中,我们基于DCs对一种新型的小分子化合物FC-99的抗炎活性(由TLR3, TLR4和TLR9诱导的)进行了研究。我们的研究首次发现：FC-99可以有效地抑制由TLR3配体poly I:C, TLR4配体LPS和TLR9配体CpG诱导的DCs的成熟。主要表现在：FC-99可以下调由TLR3, TLR4和TLR9的活化诱导的CD40和MHC-Ⅱ的表达；抑制炎症性细胞因子(如IL-6,IL-12和IFN-p)和炎症性趋化因子(CXCL-10)的产生；FC-99还可以抑制NF-κB的活化并能上调Tnfaip3的表达,Tnfaip3是TLR3, TLR4和TLR9通路重要的负调控基因。这些结果表明：FC-99调控TLR3, TLR4和TLR9诱导的DCs的成熟的机制包括影响了NF-κB的活化和Tnfaip3的的转录。MRL/lpr小鼠是一种模拟人的SLE疾病的实验动物模型,我们用这种小鼠验证FC-99的体内治疗效果。实验数据表明：FC-99的治疗可以缓解狼疮样小鼠的疾病进程,包括细胞因子的产生、自身抗体水平和大大改善了肾脏功能等。我们证明：和发病小鼠相比,FC-99治疗后可以下调模型小鼠的腹股沟淋巴结(ILN)、肠系膜淋巴结(MLN)和脾脏中mDCs的比例和CD40的表达,说明FC-99的抗炎和免疫抑制功能可能和它调控DCs的成熟和功能相关。有趣的是,和发病小鼠相比,FC-99的处理可以显著抑制IκB-a的过度活化并提高PBMCs中Tnfaip3的表达,跟我们的体外结果一致。综上,FC-99的治疗可以缓解MRL/lpr小鼠的狼疮样综合征,因此,FC-99有望成为治疗人的SLE的有效药物。
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

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本文编号：2723235