细胞自噬抑制剂3-MA预防肝纤维化的实验性研究

发布时间：2020-06-27 08:26

【摘要】：目的：通过应用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)在肝纤维化动物模型中调节自噬(autophagy)水平,观察自噬水平的改变对肝纤维化的影响,并探讨以自噬信号通路作为肝纤维化治疗的新靶点的可行性及为肝纤维化的治疗提供可能新的途径。方法：1.70只Balb/C小鼠随机分为3组,模型组及3-MA组腹腔注射20%CCl4橄榄油溶液,剂量为2ml/kg,正常对照组腹腔注射等量的橄榄油2ml/kg,同时3-MA干预组腹腔注射3-MA,剂量为15μg/g,共8w,每周2次；2.第八周时采取眼眶静脉血检测丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转酶、总胆红素；3.透射电子显微镜观察双层膜结构的自噬小体或自噬溶酶体；4.免疫组化检测：微管相关蛋白1轻链和a-平滑肌肌动蛋白；5.肝脏标本切片行HE和Masson染色,并在光学显微镜下观察纤维化程度和胶原纤维分布。结果：1.三组间ALT、AST、TBIL检测结果组间比较,模型组最高,差异有统计学意义(p0.05)；2.透射电镜下观察发现正常对照组线粒体无明显空泡化,胞内无自噬小体。模型组细胞内可见明显的线粒体空泡化,大量的双层膜结构的自噬小体,3-MA干预组空泡化的线粒体和白噬小体数目均较少；3.模型组及3-MA干预组LC3-Ⅱ明显高于空白对照组,且模型组较3-MA组高,三组间差异具有统计学意义(p0.05)；4.α-SMA的表达在模型组及3-MA组明显高于空白对照组,且模型组较3-MA组高,三组间差异具有统计学意义(p0.05)；5.HE染色发现模型组肝纤维化程度较3-MA组重;6. Masson染色分析各组纤维组织平均光密度及总面积,发现三组间差异具有统计学意义(p0.05),且模型组最高。结论：1.在CCL4所诱导的肝纤维化模型中存在自噬现象,细胞自噬参与肝纤维化的形成。2.细胞自噬抑制剂3-MA对肝纤维化有显著抑制肝纤维化进展的作用。3.3-MA能通过降低自噬水平来进而抑制肝星状细胞活化达到抑制CCl4所诱导的肝纤维化进展的目的,提示其在预防肝纤维化性治疗纤维化方面具有巨大的前景。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.2;R-332
【图文】：

柱状图,柱状图,积分,肝硬化

硕士学位论文 3实验结果纤维化计分按照王泰龄等改进的Chevallier法[23](表3-4及图3-21) 表3-4肝纤维化程度计分标准计分中央静脉周汇管区纤维间隔卖周（L) ^ 数量（N) 宽度（W) 0 无无无-1 局限、少数扩大无隔 <6/cm 细2 弥漫、多数扩大有隔 >6cm 疏松、宽3 - 肝硬化肝硬化致密、宽_4 - - - S2/3 活检面积计分：L+P+2(N*W)14

条纹,胶原纤维,总面积,纤维

性细胞浸润及坏死有所改善，蓝色的胶原纤维主要分布于血管周围，在细胞间质中也可见少量的蓝色条纹，纤维间隔形成较少且细，见图3-22至图3-24。W_图3-22正常对照组（250 X) 图3-23模型组（250 X)W图 3-24 3-MA 干预组（250 X)3.6.2胶原纤维平均光密度及总面积分析表如下应用图片分析软件Image Pro Plus 6计算平均光密度值和纤维总面积表3-5各组胶原纤维半定量分析（？土S) 组别平均光密度纤维总面积（uitf)正常对照组 0.2534±0.0593 45557.0±10825.3模型组 0.4761*0.0427* 204021.2士55153.1*3-MA 组 0.3458±0.02935*# 112301.9±33730.8*#注：*与正常对照组比较，P<0. 05;#与模型组比较，p〈0. 05Masson染色从胶原纤维定性及半定量的两方面来分析肝纤维化的形成，masson对早期肝纤维化诊断具有特殊意义，能更?

【参考文献】