应用间充质干细胞诱导复合组织移植免疫耐受的研究

发布时间：2020-07-03 09:56

【摘要】：背景：脂肪来源间充质干细胞(adipose-derived (ASCs) mesenchymal stem cells)和骨髓来源间充质干细胞(bone marrow, BMSCs)都已被多项动物和临床试验研究证实有着强大的免疫调节作用,在促进移植免疫耐受,缓解自身免疫性脑病,溃疡性结肠炎等免疫疾病上效果较为显著。但对来自同一供体的两种细胞的免疫调节作用进行平行比较,到目前为止尚未见文献报道。 本文从研究复合组织移植的特性入手,通过对复合组织移植术后免疫抑制和免疫调节等研究思路的反思,理清了间充质干细胞在促进复合组织移植免疫耐受研究所面临的机遇与挑战。在客观分析了间充质干细胞免疫调节机制的基础上,着重探寻了抑制免疫细胞活化,促进嵌合体发生的新路径。对脂肪来源间充质干细胞临床应用的可推广性、受体自身和第三方获取干细胞的可行性、受体嵌合体诱导免疫耐受的可能性、通过介导特殊靶点调节整个细胞通路信号系统的整体性以及间充质干细胞用于复合组织移植免疫耐受研究可能带来的诸多受益方面的研究前景,作出了较为严谨而科学的理论分析与展望。与此同时,笔者以细胞学试验为基础,通过比较骨髓干细胞和脂肪干细胞两种不同来源的间充质干细胞在异体细胞刺激和非特异性细胞增殖抗原作用下的调节作用,来探寻复合组织移植免疫调节作用的创新路径。通过实证研究试图回答以下问题：第一,骨髓干细胞和脂肪干细胞两者的免疫调节作用是否有可比性；第二,在诱导免疫耐受方面,BMSCs和ASCs有何联系与区别；第三,两种不同来源的间充质干细胞中究竟哪种间充质干细胞的免疫调节作用更好?它们的细胞学机制是什么? 方法：脂肪来源间充质干细胞和骨髓来源间充质干细胞分别自Lewis, Brown Norway(BN),以及ACI鼠提取并经过流式细胞学分选纯化,其标准为：CD29, CD90双表达阳性；CD11, CD45双表达阴性。为监测这两种细胞的免疫调节作用,本试验以Lewis和BN鼠脾细胞的混合淋巴细胞培养为基础试验设定。具体分组为：1) Lewis鼠脾细胞单独培养；2) Lewis鼠+放射后Lewis鼠脾细胞培养；3)Lewis鼠+放射后BN鼠脾细胞培养；4) Lewis鼠+PHA刺激。在第3,4组中加入来源不同,年龄不同的ASCs或BMSCs以观察抑制细胞增殖的作用。同时,在第3实验组,ASCs和BMSCs在混合淋巴细胞培养的第三天加入(延迟调节)或从中移除(中断调节)。此外,第3实验组中的培养基也将转移到新的Lewis鼠+BN鼠混合淋巴培养中。 结果：ASCs和BMSCs表现出非常相似的物理和生物学性状,并且都表现出极低的免疫原性。当ASCs和BMSCs加入第3,4实验组后,都有明显的抑制细胞增殖的作用,这一抑制作用与干细胞的数量呈正相关。在同等数量时,ASCs比BMSCs在调节特异性和非特异性刺激细胞增殖上,有着显著的优势。而无论是延迟或是中断调节,抑制的比例都非常有限；干细胞的培养基并没有显著的调节作用。有意思的是：不同年龄的ASCs和BMSCs有着不同的性状：从幼年组动物中提出的干细胞再增殖,分化,纯化干细胞的比例上比老年组更加活跃。但是他们的免疫调节作用没有统计学差异。 结论：应用以干细胞为主要治疗手段的治疗方案,是达到移植免疫耐受最有前景的方法之一。脂肪来源间充质干细胞,比骨髓来源有着更好的临床应用可操作性和可获取性,在可预期的未来,将成为BMSCs可行的替代方法之一。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【图文】：

成骨细胞诱导：黑染韩质沉积 软骨细胞诱导：蓝染的软骨母细胞^

本文编号：2739512