连接肽（Linker）对抗人纤维蛋白单链抗体二聚体形成的作用

发布时间：2020-07-08 16:57

【摘要】：单链抗体(Single-chain，Fv)是利用基因工程的方法，将免疫球蛋白重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)用一连接肽(Linker)相连接而成的，具有抗原特异性强、分子量小、组织穿透力强、体内滞留时间短、血中清除快、无Fc段所引起的非特异性反应、C-端能与其它分子相连接等优点，因而在肿瘤临床定位诊断、导向性治疗以及基础理论研究等方面具有十分重要的作用。抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5的轻、重链可变区基因是从抗人纤维蛋白单克隆细胞系8E5中提取的，该单链抗体能特异性识别人纤维蛋白β链7肽，因而在血栓病的定位及导向溶栓等方面有诱人的应用前景。近来的研究表明，单链抗体若能形成二聚体结构，可以明显提高其抗原结合力及其自身的稳定性。同时，用连接肽连接异源的轻、重链可变区基因，形成的二聚体可以同时识别二种不同的抗原，即具有双特异性，这在临床应用中具有十分重要的价值。本文利用已有的抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5，利用基因工程的方法，对其连接肽进行了改造，分别用三种连接肽取代原有连接肽以研究这些连接肽对该单链抗体二聚体形成、抗原结合力、稳定性的影响。 方法：以人工合成三种新的连接肽DNA作为引物的一部分，经PCR扩增分别将这三种新连接肽插入V_H与V_L之间，取代原有的连接肽，用SDS-PAGE观察表达结果，用ELISA法检测其抗原结合力及稳定性。 结果：本文新构建的三种质粒pOPE51-8E5-5、pOPE51-8E5-10A、pOPE51-8E5-10B均能在大肠杆菌JM109中表达，它们的表达产量均高于
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1998
【分类号】：R392
【图文】：

结周阵白popE51一8E5一5，popE51一8E5一loA，p:海生物工程公司合成的引物，以poP们所需的片段，经Puvn和Mull双酶含有我们所设计的三种连接肤DNA.Pvull和Mull双酶切后获得的载体片pE51一8E5一5、popE51一8E5一loA、popE5109菌，在LBGA平板上挑选出阳性养扩增提取质粒，琼脂糖电泳初步筛m酶切筛选，去除假阳性，再用PCR法中各有20一30个克隆是我们所需要的，研究.

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【参考文献】

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1 陈宇萍,王琰,王雅明,刘群英,朱迎春,化冰,高荣凯;抗红细胞双价小分子抗体的构建及表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1997年03期

本文编号：2746799