人乳头瘤病毒16型L1结构基因的克

发布时间：2020-07-13 15:26

【摘要】：人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一类双链小分子DNA肿瘤病毒。人乳头瘤病毒16型(Human Papillomavirus Type 16，HPV16)是一种人生殖道感染中常见高危型HPV。分子流行病学资料和实验室研究充分论证了HPV与人类恶性肿瘤发生发展之间的关系，尤其HPV16与子宫颈癌之间的高度相关性。据报道90％以上的子宫颈癌是由HPV16和HPV18引起的。研究表明中国妇女宫颈癌的发生与HPV16关系密切。为了降低HPV16感染率及其相关肿瘤的发病率和死亡率，研制HPV疫苗势在必行。 由于HPV难以通过体外组织培养或感染动物而进行繁殖，因此研究HPV疫苗的策略主要集中在基因工程技术方法上。分子生物学研究发现HPV病毒结构蛋白的L1和L2构成病毒的衣壳部分，单纯的L1就足以形成病毒样颗粒(virus-like particles，VLP)，并具有良好的免疫中和作用。因此我们选用HPV16 L1组装的VLP作为防治HPV16的感染及相关疾病的候选疫苗。 HPV16 L1蛋白的一级结构的变异可能会影响其高级结构——VLP的形成，有些L1蛋白变异体由于只能形成壳粒，从而影响了L1蛋白的免疫原性，故必须对疫苗研制所需的L1基因进行分析、筛选和鉴定。由于E．coli表达出的L1蛋白不能形成VLP，即使通过变性、复性、再变性、再复性等复杂的操作虽可形成一定量的VLP，但复性产率极低，仅有0.02-0.04％，显然不能满足于生产和研究所需，难以对L1-VLP的组装过程及分子生物学特性、免疫原性做出正确的估价。而真核细胞表达的L1蛋白，可直接获得较大量的VLP，具有HPV外壳蛋白的天然构象和生物学活性，所以我们选择真核表达体系——杆状病毒表达系统作为我们的研究工具。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R346
【图文】：

298220瓜取图1一2.HPV16LI的PCR扩增Figl一2AgroseGelAnalysisofHPV16LlpBR322H/inflmarker;2·LlPCRProduction:3.PCRNegativeeontrol4l，621-517(506)396一344二298220一154一卜沙图1一3.HPV16LlPCR产物的酶切鉴定Figl一3.EnyzmeDigestionresultsofHPV16Llgene1.pBR322舰inflmarker;2.LIPCRProducts3.LlDigestedbyBmaHI;4.LlDigestedbyEc0RI

220一154一卜沙图1一3.HPV16LlPCR产物的酶切鉴定Figl一3.EnyzmeDigestionresultsofHPV16Llgene1.pBR322舰inflmarker;2.LIPCRProducts3.LlDigestedbyBmaHI;4.LlDigestedbyEc0RI

此区域的序列与他们完全一致。通过DN些华尽帮VecotrN‘”分子生物学软件包对序列进行了比较，变异情况详见下面的表裕:图1一7Figl一7Li基因内1264一1312区段的分析细yalsisof1264一1312regionofLIgenes1:ProtoytpeLlgene(SeedorfKet公1985)2:ProtoPyteLlse妙enoes妙hisp叩e)r

【引证文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 刘红;广东分离株HPV16L1基因克隆及其蛋白的分泌表达[D];暨南大学;2008年

本文编号：2753643