Daple基因在鼠脑内及体内的空间分布表达

发布时间：2020-07-15 21:03

【摘要】：研究目的： Daple又称为含有高亮氨酸残基的Dvl相关蛋白。Daple是Girdin家族的基因(Girdin, Daple, FLJ004354)。其中Daple和Girdin在N端有很大的同源性,(54%的氨基酸相同),意味着两个基因功能相似,而C末端则与Girdin较少的相似性,只有27%,这意味着Daple具有不同于Girdin的特殊功能。Daple在Wnt经典途径中抑制β-catenin聚集和T细胞因子(Tcf)的转录活性,起负调节作用。而在非经典Wnt通路中增加蛋白激酶C(PKC)与Dvl互相作用激活Rac蛋白,起正调节作用。目前已知Daple在出生后期细胞迁移中起着重要的作用,Daple可能会影响胚胎发育、血管发生和肿瘤发展。目前哺乳动物Daple的分布表达的仍不明确。因此,全面了解Daple蛋白的功能及分布对于进一步了解相关疾病的发病机制及预后有重要意义。本研究重点是Daple基因的表达分布。 材料与方法： 通过SA剪接受体技术制作的Daple基因敲除的老鼠购自transgenic公司。出生7天的老鼠(p7；雌性)和8周老鼠(p56；雄性)(野生型老鼠(+／+)同源性老鼠(-／-))用4%PFA灌注,解剖出组织、冰冻、冰冻切片,解冻安装在载玻片上。Daple分布可以通过Lac Z染色显示并可以应用原位杂交技术验证LacZ染色的结果。用33P或地高辛标记的Daple cRNA探针(外显子30)。根据daple基因在脑中的分布,进一步对神经进行免疫组化染色,用PGP9.5, GFAP标记,判定daple基因是在神经元或是胶质细胞表达。根据其分布的特点对脑内可能出现的异常酶进行PCR和RT-PCR分析。 结果： 我们发现Lac Z染色的p7和p56的同源性Daple敲除的小鼠在纹状体、脑室室管膜细胞、小脑(大概在皮质上的浦肯野细胞)、海马、嗅球、脊髓、气管、膀胱、毛囊、舌、胃、脾、胰腺、心肌细胞、视网膜、肾乳头和门静脉,beta-geo(Daple启动子介导Lac Z和抗新霉素基因融合)表达而野生型小鼠不表达。原位杂交技术也证实了这个结果。我们发现在脉络丛和海马CA3区,Daple在神经胶质细胞中表达,而在纹状体中,Daple同时在胶质细胞和神经细胞中表达。酪氨酸羟化酶(TH)RT-PCR和eal time PCR的结果显示同源性Daple敲除小鼠和野生型小鼠在酪氨酸羟化酶表达中并没有显著性差异。 结论： 我们成功的描述出Daple的基因表达。Daple在脑、脊髓、眼、膀胱上皮及平滑肌、支气管上皮、胃、肾脏、睾丸、输精管、毛囊、舌、门静脉表达显著。Daple在小鼠脑中的分布主要在纹状体、海马、齿状回、皮质、黑质和室管膜细胞上。在脉络丛和海马CA3区,Daple在神经胶质细胞中表达,在纹状体中Daple同时在胶质细胞和神经细胞中表达。通过酪氨酸羟化酶PCR的结果显示同源性Daple敲除小鼠和野生型小鼠在酪氨酸羟化酶表达中并没有显著性差异,提示同源型敲除小鼠中多巴胺含量与野生型小鼠区别不大。希望通过了解Daple在小鼠全身器官、中枢神经系统分布情况,可以更清楚地了解Wnt信号通路的作用,并为以后的神经功能实验打下基础。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：2757006