兔脂肪源性干细胞体外成骨特性的研究

发布时间：2020-07-20 13:05

【摘要】： 目的:(1)分离、培养及鉴定兔脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)(2)探讨及评估ADSCs的体外成骨特性。方法:(1)取3月龄新西兰白兔颈后部皮下脂肪组织,Ⅰ型胶原酶消化获得细胞。绘制细胞生长曲线,采用免疫细胞荧光法检测细胞表面抗原CD44、CD45;分别加入成骨、成脂诱导培养液对所获得细胞进行成骨成脂诱导,并分别进行形态学、碱性磷酸酶、钙盐沉积和油红O染色相关检测;(2)将所获得ADSCs分为成骨诱导组和非成骨诱导组,分别于诱导后1W、2W、3W、4W检测两组的碱性磷酸酶浓度和钙离子浓度并作统计分析。结果:(1)所获细胞CD44阳性表达,CD45阴性表达;所绘制的生长曲线成典型的“S”型。(2)在成骨诱导条件下,碱性磷酸酶及钙盐沉积均呈阳性表达;在成脂诱导条件下,油红O染色为阳性。(3)ALP浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别,在各个时间点诱导组ALP浓度均高于非诱导组(P0.05,n=5),诱导组ALP浓度在不同诱导时相其浓度变化趋势不同(P0.05,n=5);钙离子浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别,在各个时间点诱导组钙离子浓度高于非诱导组(P0.05,n=5)。诱导组钙离子浓度在不同诱导时相其浓度变化的趋势不同(P0.05,n=5)。结论:脂肪干细胞强大的体外增殖和自我更新能力以及良好的成骨分化潜能使其有望成为理想的骨组织工程的种子细胞。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329
【图文】：

脂肪组织,贴壁细胞,细胞,培养瓶

原代 ADSCs 接种后第 1 天，仅有少量短梭形或小多角形细胞散在贴壁，大部分未贴壁细胞为双凹形的红细胞(图 1-4)，呈一簇一簇状聚集，飘落在培养瓶底，但并不贴附于瓶底，此外还可见一些漂浮的杂质。第一次换液后，未贴壁细胞和漂浮的杂质已去除，可见大部分贴壁细胞呈宽大扁平的成纤维细胞样细胞（图 1-5），其间也可见少量三角形、多边形细胞，均匀的分布于培养瓶底。培养 5 ～ 6d 后细胞可达 8 0 ％～ 9 0 ％汇合，这些贴壁细胞形态为典型的长梭形细胞，呈大小不一的集落状、漩涡状生长（图 1-6、1-7）。培养 7～ 9 d 可形成 1 0 0 ％融合的致密单层。传代后细胞形态变化不大，主要为长梭形，少数为三角形或多边形，呈漩涡状生长，增殖能力旺盛，细胞生长速度较原代细胞明显增快，3-4d 可长满，培养 20 天以上未见自发性钙盐沉积。连续传 9 代，仍保持良好的细胞形态与增殖能力，细胞形态与生长状态均变化不大（图 1-8、1-9）。

无菌操作,脂肪组织,贴壁细胞

胰酶消化,细胞间隙,回缩,贴壁细胞

胰酶消化后细质回缩，细胞间隙增大，图 1-4 原代培养 1 天后可见大量漂浮的红细胞和杂细胞之间不再连接成片 ×10 质及少量呈小梭形、小多角形贴壁细胞，×10图 1-5，原代首次换液后，未贴壁细胞和漂浮的杂质图 1-6，原代培养 4 天后，融合超过 60%，已去除，可见大部分贴壁细胞呈宽大扁平的成纤维细胞形态无明显变化，×10细胞样细胞，×10

【参考文献】