人巨细胞病毒UL70和UL35蛋白与宿主因子相互作用的研究

发布时间：2020-07-23 03:55

【摘要】：人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)是疱疹病毒家族p亚科的代表成员,在正常成人体内常表现为无症状的隐性感染,但在诸如艾滋病人、器官移植患者等免疫缺陷人群中常引发很高的发病率和致死率,也是导致新生儿先天发育迟缓、智力低下的主要病毒诱因。为了阐释人巨细胞病毒裂解感染过程中的关键事件,本文从影响病毒复制过程和立即早期基因启动子(major immediate-early promoter, MIEP)转录激活的角度,通过分别研究两对病毒-宿主蛋白间相互作用,揭示宿主因子调控病毒裂解感染的分子机制。 (1)人巨细胞病毒引发酶UL70在病毒基因组复制过程中定位于细胞核的机制还不清楚,也没有宿主因子可以促进UL70蛋白入核的研究报道。我们通过酵母双杂交筛选获得可以与UL70蛋白相互作用的宿主因子,热休克蛋白家族成员DNAJB6;其经可变剪接产生两个蛋白异构体,DNAJB6a和DNAJB6b。DNAJB6a由于具有核定位信号而定位于细胞核,DNAJB6b缺乏这一信号序列则定位于细胞质。间接免疫荧光和DNAJB6表达上调或下调实验证明,DNAJB6a能够结合UL70蛋白帮助后者运输入核,而DNAJB6b结合UL70蛋白却阻碍后者运输入核；同时也间接影响了病毒下游蛋白的表达和成熟颗粒的产出量。这些结果暗示宿主可以通过调控DNAJB6蛋白异构体的表达影响病毒引发酶UL70细胞定位,进而导致病毒基因组DNA复制和裂解感染过程的变化。 (2)人巨细胞病毒UL35蛋白可以激活病毒MIEP转录,其详细调控机制尚不清楚。酵母双杂交筛选证实干扰素诱导产生的细胞因子IFI35蛋白可以与病毒UL35蛋白相互作用,随后的免疫共沉淀确定二者特异性结合,以及它们之间相互作用的结构域。间接免疫荧光发现UL35蛋白和IFI35蛋白能够在细胞核内共定位。IFI35蛋白上调可增强UL35依赖的MIEP转录激活,但下调却几乎不影响MIEP转录活性；同样,IFI35蛋白的表达上调促进了病毒下游基因的表达和复制过程,也加快了病毒的生长进程。此外,UL35-IFI35蛋白间相互作用可以促进免疫因子的转录激活,这表明IFI35蛋白在病毒感染过程中发挥着复杂的作用,或许受与其结合蛋白的调控。所以,人巨细胞病毒裂解感染过程的起始不仅需要UL35蛋白激活MIEP转录,还有宿主免疫蛋白参与并促进了这一过程。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【图文】：

疫病,被膜,结构有序,双分子层

某墒炜帕＃%ririon)在人类疱疫病毒中是最大最复杂的（图1.1)，直径约230nm,由内向外分别为：包裹线性双链基因组DNA的二十面体核衣壳（capsid),包含病毒基质蛋白的被膜（tegument),来源于细胞脂质双分子层并含有病毒糖蛋白的包膜（envelope) (Chen, Jiang ct al. 1999, Trus,Gibson et al. 1999)。其中，被膜结构是疱疫病毒所特有的，不仅结构有序而1

示意图,疹病,基因组结构,示意图

图1. 2人疱v病毒基因组结构不意图（Crough and Khanna 2009)人巨细胞病毒基因组也是人类疱v病毒家族成员中最大的（图1.2)，拥有超过230kb的线性双链DNA，包括独特的长序列（unique long，UL)，独特的短序列（unique short, US)，和重复序列（repeat regions)。由于每个长序列或者短序列都可以发生倒转，所以能够形成四种基因组结构。UL或者US序列可以被四种重复序列分隔，即末端重复长序列（terminal repeat long, TRL),中间重复长序列（internal repeat long

uM Km vnia tnu wir lat* ??n _a? uui fw图 1. 3 HCMV Towne 株基因组结构(Dunn，Chou et al. 2003)2

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