人睾丸特异表达基因HSD-3.8编码蛋白质的功能研究

发布时间：2020-07-28 19:25

【摘要】：受精是雄、雌性生殖细胞之间极为复杂的相互作用过程，有赖于一系列事件在正确的时间准确地完成。正常的受精过程离不开成熟的功能完整的精子的参与。在精子成熟和参与受精过程中，有许多睾丸特异表达的基因在调控因子的作用下，以既定的时空秩序开放或关闭。本室一直致力于对精子发生、受精等过程的分子机理的研究。HSD-3.8就是本实验室既往发现的人睾丸特异表达并与受精和／或精子发生有关的基因。 HSD-3.8是以不孕妇女血清先后筛选人睾丸λgt11表达文库和人睾丸cDNA文库，并利用5'-RACE及重叠区扩增基因拼接法而获得的人睾丸特异表达的基因。全长3818bp，编码蛋白质全长926个氨基酸，GenBank接受号为AF311312。根据基因组信息学分析显示该基因定位于8号染色体上，由19个外显子和18个内含子组成。亲疏水性分析提示HSD-3.8全长cDNA编码蛋白质是一个亲水性较强的蛋白质，没有明显的疏水区域。SMART和Prosite软件对该蛋白质进行结构域分析，确认HSD-3.8编码蛋白质具有糖基化位点、PKC磷酸化位点、CK-2磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、豆蔻酸化位点、酰胺化位点、ATP／GTP结合位点基序A(P-loop)，以及三个TPR区，每个TPR区又分别由三个TPR基序构成。利用以往制备的抗HSD-0.7的多克隆抗体检测在人和大鼠睾丸中表达的HSD-3.8编码蛋白，结果发现在这两种组织中仅有一大小约为55～60kDa的蛋白质能与多克隆抗体特异反应，显示HSD-3.8及其同源基因所编码蛋白质在生理状态下约为55～60kDa。推测HSD-3.8编码蛋白质的功能正常发挥需要翻译水平或翻译后水平的修饰过程。 以往的工作表明HSD-3.8编码蛋白质中的一个片段：HSD-0.7对大鼠具有比较好的抗生育效果，该片段能与GTP特异结合，且其结合具有可饱和性。酶学活性测定分析证明HSD-0.7具有GTPase酶活性，在体外能够被PKC磷酸化。据此推测，HSD-3.8蛋白可能作为一个功能活性受到GTP／GDP调节的某个因子参与调节人类的生殖过程。因此，寻找HSD-3.8编码蛋白的作用配体有利于揭示该蛋白质的生理功能。以往的工作以HSD-3.8编码蛋白质中与生育相关的片段HSD-0.7和较长的包含HSD-0.7的片段HSD-1.4作为“诱饵”蛋白，利用酵母双杂交系统分别从人卵巢和人睾丸cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白质。结果发现人G蛋白β1亚基以及人TRAF4相关因子1可能是与HSD-3.8编码蛋白相互作用的蛋白因子。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R346

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本文编号：2773333