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载脂蛋白CⅢ通过氧化应激通路促进人肾小球系膜细胞表型转分化

发布时间:2020-10-16 10:01
   本研究旨在探讨富含甘油三酯的脂蛋白(triglyceride-rich lipoproteins,TRLs)中载脂蛋白CⅢ(apolipoprotein CⅢ,ApoCⅢ)的高表达对人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)表型转分化的作用及其机制。从正常野生型小鼠(WT)及ApoCⅢ转基因小鼠血浆中提取TRLs,在体外培养的HMCs中分别给予相同甘油三酯浓度的正常TRLs(TRL-WT),或富含ApoCⅢ的TRLs(TRL-CⅢ)孵育12 h。结果显示,TRL-CⅢ中ApoCⅢ蛋白质表达水平约为WT小鼠TRLs的4倍。与阴性对照(NC)组相比,两种TRLs均可诱导HMCs中转分化标志物α-SMA及纤维化相关因子纤连蛋白、TGF-β1、CTGF、ColⅠ、ColⅣ的mRNA及α-SMA和纤连蛋白的蛋白质表达水平升高,且TRL-CⅢ较TRL-WT作用更明显。TRL-CⅢ组中,α-SMA及纤连蛋白蛋白质表达水平分别为TRLWT组的1. 4倍(P0. 05)和2. 1倍(P0. 01)。与NC组相比,两种TRLs均可引起细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平增加,且TRL-CⅢ组较TRL-WT组高1. 5倍(P0. 05);氧化应激相关因子Nox4、P22phox、PKC-β的mRNA及Nox4蛋白表达水平在两组均增高,且TRL-CⅢ较TRL-WT作用更为明显(P0. 05)。TRL-CⅢ组中,Nox4蛋白表达水平为TRL-WT组的1. 6倍(P 0. 01)。NADPH氧化酶抑制剂apocynin可使TRL-CⅢ引起的细胞内ROS水平下降约2倍(P 0. 01)。上述转分化标志物及纤维化相关因子基因及蛋白质表达水平均明显下降。本研究表明,TRLs通过氧化应激通路促进HMCs表型转分化,ApoCⅢ的高表达进一步促进该作用。
【文章目录】:
1 材料与方法
    1.1 动物
    1.2 材料
    1.3 TRLs的提取
    1.4 TRLs中甘油三酯含量的检测
    1.5 细胞培养
    1.6 Western印迹分析
    1.7 RT-PCR法检测mRNA的表达
    1.8 活性氧检测
    1.9 统计学方法
2 结果
    2.1 ApoCⅢ转基因小鼠的TRLs中ApoCⅢ含量显著增高
    2.2 ApoCⅢ促进HMCs表型转分化及纤维化
    2.3 ApoCⅢ促进HMCs中氧化应激通路的激活
    2.4 Apocynin可明显抑制ApoCⅢ引起的HMCs中ROS的产生
    2.5 Apocynin降低ApoCⅢ引起的HMCs表型转分化及纤维化
3 讨论

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号:2843106

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