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小鼠胫骨不脱钙树脂包埋法的改良与应用

发布时间:2020-10-21 16:29
   目的改良树脂包埋复数小鼠不脱钙胫骨的方法,提高树脂包埋法的效率及稳定性,探索减少树脂切片脱片的方法。方法取15只B6小鼠共30胫骨,标记、固定、脱水、渗透后将其包埋于直径4 mm的圆柱型树脂块中,胫骨近端1/4处切断后再对剩余的3/4胫骨包埋。在包埋时将5个胫骨切面贴于平整树脂板并包埋于同一树脂块中。分别在包埋液制备、切片、染色3个阶段随机将样本分为对照组及实验组,分别在3个改良组中采用以下方案处理,包括:向包埋液冲入CO_2;在切面上涂抹包埋液;在脱塑水化前以95℃加热切片15 min。分析树脂凝固时间、切片脱片率及骨形成、成骨细胞定量指标。结果成功包埋6个树脂块,每个树脂块内有5个胫骨,胫骨横截面于同一平面上,树脂块凝固完全,适于切片。向包埋液冲入CO_2可以缩短树脂块凝固时间,提高凝固成功率。在切面上涂抹包埋液可以显著降低切片时的脱片率(P0.05)且不影响骨标记的荧光分析(P0.05)。在脱塑前加热切片可以显著降低脱塑水化后的脱片率(P0.05),且不影响成骨细胞定量分析(P0.05)。结论复数小鼠不脱钙胫骨的树脂包埋改良法有效可行,这可能是一种理想的不脱钙骨组织研究方法。
【部分图文】:

包埋,凝固时间,二氧化碳


贴纸价格昂贵,标本需要低温保存等缺点而暂时未能广泛推广。树脂包埋切片耗费的时间较长,如果可以在构建标本块时将多个骨样本按照相同位置包埋固定,切片时的效率就能明显提高。本实验室首次探索了复数胫骨平行包埋的方案,包埋时可以确保所有胫骨切面在同一平面上,切片时位置角度调整方便高效。与传统的包埋方式相比,此方案不仅明显缩短了实验的耗时,还减少了包埋STIRHEATMagneticstirbarMagneticstirrerDryiceEmbeddingsolution(withoutDMPT)CO2AirCO2AirCO2AirCO2Air0h1h4h8h图1向包埋液冲入二氧化碳可以缩短包埋液的凝固时间Fig.1FlowingCO2intotheembeddingsolutionreducespolymerizationtime.A:SchematicdiagramofflowingCO2intotheembeddingsolution;B:RepresentpicturesshowingpolymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD图2使用两次包埋的方式可将多个胫骨包埋于同一树脂块中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedbloc

包埋,胫骨,树脂,方式


olymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD图2使用两次包埋的方式可将多个胫骨包埋于同一树脂块中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedblockwithmultipletibias.http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044TimeafterflowingCO2andair(h)··1041

胫骨,包埋,切面


联,CO2冲入可PasteUn-pasteUn-pastePaste×10×20Un-pastePaste×20×40ABCNo.ofeffectiveslides***454035302520151050PasteUn-pasteRateofslidesdetachment(%)***PasteUn-paste100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%MAR(μm/d)n.sPasteUn-pasteBFR/BS(%/d)n.sPasteUn-paste2.52.01.51.00.501.41.21.00.80.60.40.20DE图3使用包埋液涂抹切面可预防切片时胫骨脱片Fig.3Applicationofembeddingsolutiononthesectionsurfacepreventsslidedetachmentwithoutaffectingcalceinlabelinganalysis.A:RepresentativescanpicturesofPasteandUn-pasteslides(scalebar=1mm);B:Representativeunstainedpasteandnon-pasteslidesundermicroscope(leftpanel:scalebar=200μm;rightpanel:scalebar=100μm);C:Representativefluorescentpicturesofpasteandnon-pasteslides(leftpanel:scalebar=100μm;rightpanel:scalebar=50μm);D:Numberofeffectiveslidesandrateofslidesdetachmentinpasteandnon-pastegroups(***P<0.001,n=6);E:Mineralappositionrate(MAR,μm/d)andboneformationrate(BFR/BS,%/d)inpasteandnon-pastegroups(n.s:P>0.05,n=12).··1042JSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044http://www.j-smu.com
【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号:2850352

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