枸杞子提取物在病理模型中的探索性研究

发布时间：2020-10-28 05:10

　　 构杞子是茄科植物宁夏枸杞的成熟干燥果实,为我国常用中药。枸杞成分复杂,本实验采用化学成分明确的枸杞子提取液LBA及枸杞多糖LBP,在常见临床病理模型：视网膜缺血、视网膜神经变性RCS大鼠及糖尿病胃瘫模型中,探索其药理学作用,为枸杞的临床应用提供理论基础和新药思路。 第一部分枸杞子提取液在视网膜缺血模型中的研究 目的：观察枸杞子提取液(LBA)对视网膜缺血的防治作用并探索其与细胞凋亡的相关联系。 材料与方法：建立前房加压诱导的大鼠视网膜缺血模型,将36只雄性Wistar大鼠随机分组,正常组4只,生理盐水组(NS组)16只,LBA组16只。LBA组及NS组于模型制作前28天分别连续经口喂食LBA (1mg/kg)及等量生理盐水(NS),LBA组及NS组根据灌注时间的不同,再分为灌注后12h、24h、48h及72h四组。采用HE染色和TUNEL法检测,观察LBA组及NS组视网膜中各层神经元的变化,应用免疫组织化学方法检测Fas/FasL蛋白的表达探索其与细胞凋亡的联系。 结果：(1)HE染色：NS组大鼠内核层缺血再灌注12小时之后厚度轻微变薄,细胞数略微减少,此时内网层、外网层及外核层变化不大。24小时后,外网层变薄,外核层变化轻微,内核层结构层次紊乱,视网膜以节细胞数减少最为显著。48小时后,各层厚度变薄程度逐渐更加明显,以内核层最为显著,细胞数大量减少。72小时后,各层细胞进一步变薄。与NS组相比,不同时间点LBA组大鼠内核层至内界膜厚度,均超过NS组(P0.01),内核层细胞数和节细胞数比NS组多,细胞形态及排列也比较规整。 (2) TUNEL检测：正常鼠无细胞凋亡表现,TUNEL染色呈阴性反应。12小时后生理盐水组内核层与视网膜节细胞层均可观察到TUNEL阳性细胞,到24hTUNEL阳性细胞明显增多,内核层最为明显,而外核层无明显的细胞凋亡征象。24h开始TUNEL阳性细胞逐渐减少,到72h时凋亡细胞只有3-6个/100μm。LBA组TUNEL阳性细胞表达规律与盐水对照组类似,TUNEL阳性细胞在12、24、48h比生理盐水组有显著减少。 (3) Fas/FasL染色：正常鼠不表达Fas/FasL阳性细胞。12小时后生理盐水组内核层与视网膜节细胞层均可观察到Fas的少量表达；到24h后Fas阳性细胞明显增多,内核层最为明显。到72h后Fas阳性细数明显减少。LBA组Fas阳性细胞表达规律与盐水对照组类似,Fas阳性细胞细胞在各个时间段比生理盐水组均有显著减少。FasL的表达表达规律早期与Fas及TUNEL染色表达规律均相似,12小时后生理盐水组内核层与视网膜节细胞层均可观察到FasL的少量表达,24h后FasL阳性细胞明显增多,达到高峰,以后逐渐下降但72h后仍维持高表达。LBA组FasL阳性细胞数在各个时间段比生理盐水组均有显著减少。 结论：(1)视网膜缺血模型前28天连续经口喂食LBA1mg/kg,可以有效保护大鼠视网膜,内核层变薄程度显著降低,各层细胞数比对照组也显著增加。 (2)细胞凋亡是导致视网膜缺血再灌注损伤原因之一,大鼠经口喂食LBA可以显著降低此类凋亡。 (3) Fas/FasL凋亡信号系统的参与是造成视网膜神经元损伤的机理之一,LBA通过有效降低Fas/FasL阳性细胞数,达到保护视网膜缺血损伤的作用。 第二部分：枸杞子提取液对RCS大鼠视网膜的探索性研究 目的：观察枸杞子提取液(LBA)对RCS大鼠视网膜色素变性的治疗作用。 方法：RCS大鼠60只,随机分为给药组和对照组各30只。给药组大鼠出生后第10天开始喂食LBA(1mg/kg),对照组大鼠喂食等量生理盐水。两组大鼠分别在生后25、35、50d处死,取出眼球,制备组织切片,HE染色和TUNEL检测视网膜感光细胞的数量,Caspase-2染色检测LBA对细胞凋亡的作用。 结果：给药组大鼠出生25d时,感光细胞数目比对照组细胞数目多；35d时,感光细胞数目较25d时有所下降；50d时感光细胞数目与对照组比较无明显差异。LBA组在第25天阳性感光细胞明显多于对照组。RCS大鼠给药组25d时TUNEL检测阳性细胞数目与对照组相比明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。RCS大鼠LBA组在25天和35天时Caspase-2阳性细胞主要分布于内核层及节细胞层,实验组第25天阳性细胞数为7.14±1.86,明显低于对照组(P0.05),之后两组差别逐渐变小,到第50天,两组的阳性细胞数差别不大。 结论：在RCS大鼠视网膜变性的早期,LBA可以使感光细胞得到更多存留,对早期变性的神经元发挥保护作用。LBA对凋亡的抑制作用可能与抑制Caspase-2蛋白表达有关。 第三部分：LBP对大鼠糖尿病胃瘫模型血糖及胃动力研究 目的：本实验采用枸杞多糖(LBP)对糖尿病大鼠模型并发症胃瘫进行探索性研究,希冀为糖尿病胃瘫的临床治疗提供依据和新的治疗方法。 材料与方法：本实验中,LBP的口服剂量分为三组,每天100,200and400mg/kg,实验前提前连续喂食28天后,建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠病理模型,测量血液中葡萄糖、胰岛素含量及胰岛素抵抗指数(IRI)、Ghrelin、Ghrelin mRNA、胃排空率、凋亡指数(AI)及Bcl-2/Bax比值,并进行相应的分析。 结果：LBP显著降低葡萄糖、胰岛素及IRI水平(P0.05)。Ghrelin在LBP给药后显著升高,呈剂量依赖性(P0.05)。糖尿病大鼠Ghrelin mRNA在胃粘膜表达增加,但在LBP给药后显著降低(P0.05)。糖尿病LBP给药组胃动力及胃排空率比对照组显著增高(P0.05)。Bcl-2/Bax比值糖尿病LBP给药组比对照组显著增高(P0.05),凋亡指数显著降低(P0.05)。 结论：实验中我们发现LBP通过降低血糖及IRI水平,增加胃粘膜Ghrelin的表达及降低胃细胞凋亡,能显著改善糖尿病胃瘫的胃动力状况。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R-332;R285.5
【文章目录】：
目录
CONTENTS
中文摘要
英文摘要
符号说明
第一部分 枸杞子提取液在视网膜缺血模型中的研究
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
第二部分 枸杞子提取液对RCS大鼠视网膜色素的探索性研究
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
第三部分 LBP对大鼠糖尿病胃瘫模型血糖及胃动力研究
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    结论
    参考文献
综述
    参考文献
致谢
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本文编号：2859638