帕金森病脑片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途径研究

发布时间：2017-04-05 02:01

  本文关键词：帕金森病脑片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途径研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：建立离体脑片的培养体系与研究系统,在脑片水平上建立帕金森病模型。研究多巴胺和左旋多巴对于中脑离体脑片多巴胺能细胞的毒性作用及其机制,以及醌氧化还原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)对于多巴胺细胞损伤的保护效应,从而进一步探究帕金森病的发病机制以及治疗措施。 方法：建立并评价离体脑片模型,通过免疫荧光、蛋白质印迹(Western Blot)检测目标蛋白多巴胺能细胞的特异性蛋白(Tyrosine hydroxylase,TH)的表达,运用氯化硝基四氮唑蓝NBT/甘氨酸法等实验技术,检测醌化蛋白的含量变化,从而鉴定不同浓度多巴胺对黑质脑片多巴胺能细胞的毒性作用及其与醌蛋白形成的相关性；通过将囊泡单胺类转运体(Vesicular monamine transporter2,VMAT2)进行拮抗,探究多巴胺的毒性损伤与胞质内游离多巴胺的相关性。运用离体脑片模型,研究左旋多巴对于多巴胺神经元和5-羟色胺神经元的毒性效应。通过运用小分子Ⅱ相酶诱导剂萝卜硫素(Sulforaphane, SF)诱导体内醌氧化还原酶NQO1的表达,检测探究诱导剂对于多巴胺造成的细胞毒性的预防作用。 结果：成功建立了离体脑片培养体系及基于多巴胺醌蛋白病因机制的帕金森病脑片模型。当培养体系多巴胺浓度达到600μM,中脑脑片多巴胺能神经元活性显著降低,且同时细胞内醌蛋白含量随多巴胺浓度上升而增加。将VMAT2拮抗后,多巴胺细胞存活率进一步降低,同样伴随醌蛋白含量升高。经1μM浓度SF诱导NQO1后,能有效拮抗多巴胺的毒性效应,细胞活性显著提高且醌蛋白含量减少。运用左旋多巴后可导致中脑多巴胺细胞以及中缝核5-羟色胺细胞存活率下降,在浓度为600μM时有显著差异,并与左旋多巴浓度负相关,拮抗VMAT2后进一步增加细胞的损伤。 结论：在脑片模型上,实验结果显示不同浓度多巴胺对于黑质多巴胺能细胞的毒性损伤与醌蛋白形成有关,提示帕金森病病因可能与多巴胺自身代谢过程中醌和醌蛋白的产生有关。另外,验证了帕金森病运用左旋多巴治疗过程中产生的并发症可能同样与多巴醌及其醌蛋白相关,且左旋多巴的这种毒性效应累及到多巴胺神经元和5-羟色胺神经元。在脑片水平验证了高表达醌氧化还原酶NQO1对多巴胺引起的细胞毒性作用具有一定的保护效应。这为帕金森病的预防和治疗措施的进一步研究具有参考价值。
【关键词】：脑片模型 帕金森病 多巴胺醌蛋白毒性 Ⅱ相酶诱导剂保护效应
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R742.5
【目录】：

• 论文摘要6-8
• Abstract8-11
• 综述11-16
• 第一章.建立离体脑片的培养体系与研究系统16-25
• 前言16-17
• 1 材料与方法17-21
• 1.1 实验材料17-19
• 1.2 实验方法19-21
• 2 结果21-24
• 2.1 免疫焚光法检测FBS培养下离体中脑脑片TH阳性细胞21
• 2.2 免疫焚光法检测HS+5m/mL葡萄糖培养下离体中脑脑片TH阳性细胞21-22
• 2.3 免疫焚光法检测HS+6.5ing/mL葡萄糖培养下离体中脑脑片TH阳性细胞22-23
• 2.4 FBS与HS培养条件下的离体脑片边缘23-24
• 3 讨论24-25
• 第二章.DA对离体脑片多巴胺能细胞的损伤作用25-37
• 前言25
• 1 材料与方法25-29
• 1.1 实验材料25-27
• 1.2 实验方法27-29
• 2 结果29-35
• 2.1 DA对离体脑片多巴胺细胞的毒性影响29-32
• 2.2 RS拮抗VMTA2对于离体脑片的损伤32-34
• 2.3 离体中脑脑片醌蛋白检测34-35
• 3 讨论35-37
• 第三章.SF对于离体脑片DA毒性的保护作用37-47
• 前言37
• 1 材料与方法37-42
• 1.1 实验材料37-39
• 1.2 实验方法39-42
• 2 结果42-45
• 2.1 SF预处理对离体脑片中NQO1的诱导42-43
• 2.2 SF预处理后对离体脑片多巴胺能细胞DA损伤的影响43-45
• 2.3 SF对于醌蛋白的作用45
• 3 讨论45-47
• 第四章.左旋多巴对于离体脑片多巴胺细胞和5-羟色胺细胞的毒性作用47-55
• 前言47
• 1 材料与方法47-50
• 1.1 实验材料47-48
• 1.2 实验方法48-50
• 2 结果50-53
• 2.1 左旋多巴对离体脑片多巴胺细胞的损伤50-52
• 2.2 左旋多巴对离体脑片5-羟色胺细胞的毒性影响52-53
• 2.3 离体中缝核脑片醌蛋白检测53
• 3 讨论53-55
• 全文小结55-56
• 参考文献56-65
• 致谢65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 任萍;张愚;;脑片培养在神经科学中的应用[J];中华神经医学杂志;2006年11期

2 任今鹏,蒋雨平;囊泡单胺转运体的研究进展[J];中国临床神经科学;2004年01期

3 关婷;鲍远程;余元勋;方长水;陈丽娟;;帕金森病发病机制的研究[J];现代中西医结合杂志;2009年34期

4 罗杰峰;黎海燕;沈岳飞;;星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年42期

5 何志慧;蒋莉;陈恒胜;张晓萍;;离体培养大鼠海马脑片的形态学与细胞反应性研究[J];重庆医科大学学报;2008年05期

6 王玉凯,刘焯霖,陶恩祥,徐严明,李宝琴,宁玉萍;Wistar乳鼠中脑黑质器官型脑片的培养[J];中山医科大学学报;2002年03期

  本文关键词：帕金森病脑片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途径研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：286253