血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞的造血分化

发布时间：2020-11-07 16:03

　　 第一部分:小鼠胚胎干细胞的体外培养 目的:胚胎干(ES)细胞是从早期胚胎中分离出来的全能细胞系,体外培养时可维持其发育的全能性、未分化状态和正常的二倍体核型,能发育为含外、中、内三个胚层的胚胎体,在体内能参与包括生殖系的嵌合体。ES细胞可作方研究细胞定向分化、多发育潜能及细胞发育分化机制的模型,并有望应用于细胞和基因治疗领域,从而引起人们的广泛兴趣。ES细胞的体外培养条件比较严格,不仅要保持其扩增、增殖的能力,而且要维持其未分化的特性。本部分以原代小鼠胚胎成纤维细胞(PMEF)或白血病抑制因子(LIF)与ES细胞系共培养方法来体外扩增ES细胞,为以后的研究工作打下基础。 方法:本研究利用小鼠的ES-D3细胞系作为研究对象。首先取孕13-14天的胎鼠组织制备PMEF作为饲养层,经丝裂霉素-C灭活后用于ES细胞的培养,将ES-D3细胞分别培养于PMEF上或含LIF的ES细胞培养基中,培养基为高糖DMEM,内含体积分数20%胎牛血清、1%非必需氨基酸、0.1 mmol/L β-巯基乙醇和2 mmol/L谷氨酰胺。观察在此两种条件下,ES-D3细胞的生长状况和克隆形成情况。 结果:在存在PMEF或有LIF时,体外均支持ES细胞的生长扩增。但两种
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R329
【部分图文】：

四、ES细胞克隆的消化ES细胞克隆经胰蛋白酶.EDTA作用后，其结构致密的克隆逐渐变得松散，自克隆的外层逐渐脱落，可被消化为单个细胞。见图I一6。图I一1:刚贴壁时的P侧田F(ZOX)图I一2:半汇合时的P州田F(20x)图I一3:完全融合的PME(r20X)图14:Es细胞在PMEF上的鸟巢状克隆(20x)图I一5:Es细胞在无PN田F时的克隆(20X)图I石:Es细胞克隆的消化(20x)

四、ES细胞克隆的消化ES细胞克隆经胰蛋白酶.EDTA作用后，其结构致密的克隆逐渐变得松散，自克隆的外层逐渐脱落，可被消化为单个细胞。见图I一6。图I一1:刚贴壁时的P侧田F(ZOX)图I一2:半汇合时的P州田F(20x)图I一3:完全融合的PME(r20X)图14:Es细胞在PMEF上的鸟巢状克隆(20x)图I一5:Es细胞在无PN田F时的克隆(20X)图I石:Es细胞克隆的消化(20x)

四、ES细胞克隆的消化ES细胞克隆经胰蛋白酶.EDTA作用后，其结构致密的克隆逐渐变得松散，自克隆的外层逐渐脱落，可被消化为单个细胞。见图I一6。图I一1:刚贴壁时的P侧田F(ZOX)图I一2:半汇合时的P州田F(20x)
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 从玉华;;从皮肤中提取干细胞[J];中学生优秀作文(中考专刊);2009年10期

2 曾小娟;黄英;;浅谈对年轻护士的培养[J];内蒙古中医药;2010年19期

3 邢婧;靳杭红;任欢;;如何培养门诊护士的职业素质[J];医学信息(中旬刊);2011年06期

4 傅金海;;临床药师的培养及管理[J];中国现代药物应用;2011年13期

5 扈秀武;;肺炎链球菌致双耳化脓性中耳炎1例报道[J];检验医学与临床;2011年14期

6 蔡珍珍;;高校学生干部的培养、任用途径[J];齐齐哈尔医学院学报;2011年09期

7 孙德臣;;学生自学能力培养之浅见[J];才智;2011年20期

8 ;国际舞台上中国干细胞研究专家2010年4～5月的成果[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期

9 夏妍;;谈高职生物化学教学中学生能力的培养[J];科技信息;2011年19期

10 吴继霞;;县级医院培养临床药师的重要性分析[J];现代医药卫生;2011年15期

相关博士学位论文 前10条

1 谭舟;MK和GM-CSFRα在胚胎干细胞中的表达与功能研究[D];浙江大学;2010年

2 苏中渊;胚胎干细胞来源的间充质干细胞归巢及胚胎干细胞表面分子的研究[D];浙江大学;2010年

3 廖宏庆;人类不同原核数目受精卵中筛选正常优质胚胎的策略研究[D];中南大学;2010年

4 白春玲;牛孤雌多倍体胚胎与克隆多倍体胚胎的研究[D];内蒙古大学;2011年

5 曲文玉;人胚胎干细胞的分离、培养及建系[D];中国医科大学;2006年

6 李相运;小鼠胚胎干细胞多能性研究[D];西北农林科技大学;2001年

7 姚嘉宜;胚胎干细胞重新编程肿瘤细胞的研究[D];第二军医大学;2008年

8 赵惠萍;骨髓内皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞向造血细胞分化[D];中南大学;2003年

9 刘星霞;胚胎干细胞ES-D_3诱导分化为胰岛素分泌细胞及其对糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山东大学;2005年

10 谌兵来;小鼠胚胎干细胞建系新方法及TFAG促进鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的初步研究[D];中南大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 孙国杰;山羊类胚胎干细胞的分离、克隆[D];河北农业大学;2002年

2 吕一帆;胚胎干细胞在内膜损伤小鼠宫腔内移植的实验研究[D];福建医科大学;2010年

3 周文平;小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析[D];河南大学;2011年

4 姜静宜;胚胎干细胞中外源性IbeB靶蛋白的筛选及验证[D];中国医科大学;2010年

5 蔡斌;体外诱导胚胎干细胞为神经细胞模型的建立及相关因子的实验研究[D];第二军医大学;2001年

6 顾文佳;诱导胚胎干细胞向神经细胞分化的研究[D];中国医科大学;2004年

7 刘愿;小鼠球形精子受精胚胎制备及培养方法的改进[D];山东师范大学;2011年

8 秦茂林;小鼠胚胎干细胞的分离、鉴定和神经定向诱导分化[D];第三军医大学;2001年

9 吕志一;小鼠2细胞胚胎基因表达谱研究[D];西北农林科技大学;2010年

10 陈国庆;审美活动与创造力的培养[D];江西师范大学;2004年

本文编号：2874166