国产胶原酶在小鼠胰岛分离中的效果研究
发布时间：2020-12-05 12:53
目的研究一种国产胶原酶在小鼠胰岛分离中的分离效果,探索该胶原酶在胰岛分离中应用的可行性。方法将国产胶原酶分别配成不同浓度的胶原酶溶液和含中性蛋白酶的胶原酶的溶液,经胰管逆行灌注胶原酶的方法进行小鼠胰岛分离,采用Ficoll液对胰岛进行纯化,计数所得的胰岛细胞团,培养6 h后检测活性,对最佳分离结果的胰岛做同系糖尿病小鼠的肾被膜下移植,监测术后血糖和进行组织学检查,以进口Sigma胶原酶V为对照。结果国产胶原酶在小鼠胰腺消化时间、所得胰岛数量和活性效果上跟进口胶原酶V有一定差距(P<0.01),但含中性蛋白酶的国产胶原酶组在小鼠胰岛分离数量和当量上与进口胶原酶组无差异(P>0.05),分离的胰岛在体内移植后降血糖效果与进口胶原酶组无差异(P>0.05)。结论国产胶原酶结合中性蛋白酶可用于小鼠胰岛的分离。
【文章来源】：肝胆胰外科杂志. 2019年10期 第616-619页
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图1分离得到的小鼠胰岛细胞团（×100）ABCA：国产胶原酶分离得到的小鼠胰岛；B：含中性蛋白酶的国产胶原酶分离得到的小鼠胰岛；C：Sigma胶原酶V分离得到的小鼠胰岛
±33114.3±15.581.0±5.4国产胶原酶+中性蛋白酶1.0+1363U/mL6.7±0.3消化较完全130±34159.5±19.686.1±5.31.0+2726U/mL5.1±0.3消化较完全143±22171.3±12.587.2±4.8Sigma胶原酶V1.03.6±0.2消化完全149±26176.4±13.692.6±3.72.2移植后小鼠的血糖变化结果本次胰岛移植采用1.0mg/mL国产胶原酶+2726U/mL中性蛋白酶为消化液分离的小鼠胰岛，和进口胶原酶V分离的小鼠胰岛进行同系糖尿病小鼠胰岛肾被膜下胰岛移植。由图2可见，国产胶原酶分离的小鼠胰岛移植后，糖尿病小鼠的血糖可在24h内降至正常，48h内部分小鼠的血糖值有波动。移植成功后的小鼠血糖控制稳定，并可长时间维持血糖在正常水平（＞30d），与进口Sigma胶原酶分离的小鼠胰岛肾被膜下移植的结果无统计学差异（P＞0.05）。2.3移植后胰岛的组织学检查结果胰岛移植后第14天，取含胰岛的小鼠肾组织，经固定、包埋、切片后，进行HE染色和胰岛素免疫组化染色。由图3结果可知，糖尿病小鼠胰岛移植14d后，Insulin免疫组化染色显示肾被膜下较多阳性组织，说明该含中性蛋白酶的国产胶原酶组和Sigma胶原酶V组的胰岛细胞团在小鼠肾被膜下形态均较完整，活性良好，胰岛素分泌旺盛。3讨论胶原酶是溶组织梭菌的发酵产物，基于底物特异性和氨基酸分析，胶原酶的主要成分包括ColG和图2胰岛移植后小鼠的血糖变化结果3530-2302622181410622520151050血糖值(mmol/L)Sigma胶原酶V组国产胶原酶组移植后时间(d)糖尿病未移植组
混合，结合中性蛋白酶用于进行人胰岛的分离等，在胰岛分离的数量和完整度上均取得了很好的结果[15]。本实验研究了一种国产胶原酶，并结合中性蛋白酶，获得了数量较多、活性较好的小鼠胰岛细胞团，且体内移植的降血糖结果与Sigma胶原酶V的结果无差异。本研究可为该国产胶原酶的质量提升和替代进口胶原酶用于后续大动物胰岛分离的研究提供参考。参考文献：[1]LiX,MengQ,ZhangL,etal.Overcomingimmunobiologicalbarriersagainstporcineisletxenografts:whatshouldbedone?[J].Pancreas,2019,48(3):299-308.图3肾被膜下胰岛HE染色（×100）与免疫组化染色（×100）结果[2]PepperAR,BruniA,ShapiroAMJ.Clinicalislettransplanta-tion:isthefuturefinallynow?[J].CurrOpinOrganTrans-plant,2018,23(4):428-439.[3]ShapiroAM,PokrywczynskaM,RicordiC.Clinicalpancre-aticislettransplantation[J].NatRevEndocrinol,2017,13(5):268-277.[4]李玥,杨永强.胰岛分离纯化研究进展[J].中国修复重建外科志,2010,24(11):1392-1396.[5]FuHX,QiuKY,JiangX,etal.Isletdistributionindecellular-izedliverbioscaffoldsbyinfusionthroughtheportalvein[J].JBiomaterTissueEng,2017,7(5):348-354.[6]FuHX,WuLL,QiuKY,etal.Constructionandevaluationofislettransplantationunderkidneycapsuleinmouse[J].JBio-materTissueEng,2016,6(3):208-215.[7]叶丛丛,傅红兴,江玲,等.一种快速分离纯化小鼠胰岛的方法[J].肝胆胰外科杂志,2014,26(5):403-405.[8]LembertN,WescheJ,PetersenP,etal.Arealdensitymeasure-mentisaconvenientmethodforthedeterminationofporcineisletequivalentw
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的研究进展[J]. 张晓燕,国立东,刘晓艳. 中国酿造. 2018(04)
[2]一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价[J]. 蒋煊,傅红兴,邱凯燕,何云强,徐艳艳,祝青卉. 肝胆胰外科杂志. 2016(02)
[3]一种快速分离纯化小鼠胰岛的方法[J]. 叶丛丛,傅红兴,江玲,朱雁林,朱晶晶,崔晨威. 肝胆胰外科杂志. 2014(05)
[4]胰岛分离纯化研究进展[J]. 李玥,杨永强. 中国修复重建外科杂志. 2010(11)
本文编号：2899483
【文章来源】：肝胆胰外科杂志. 2019年10期 第616-619页
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
图1分离得到的小鼠胰岛细胞团（×100）ABCA：国产胶原酶分离得到的小鼠胰岛；B：含中性蛋白酶的国产胶原酶分离得到的小鼠胰岛；C：Sigma胶原酶V分离得到的小鼠胰岛
±33114.3±15.581.0±5.4国产胶原酶+中性蛋白酶1.0+1363U/mL6.7±0.3消化较完全130±34159.5±19.686.1±5.31.0+2726U/mL5.1±0.3消化较完全143±22171.3±12.587.2±4.8Sigma胶原酶V1.03.6±0.2消化完全149±26176.4±13.692.6±3.72.2移植后小鼠的血糖变化结果本次胰岛移植采用1.0mg/mL国产胶原酶+2726U/mL中性蛋白酶为消化液分离的小鼠胰岛，和进口胶原酶V分离的小鼠胰岛进行同系糖尿病小鼠胰岛肾被膜下胰岛移植。由图2可见，国产胶原酶分离的小鼠胰岛移植后，糖尿病小鼠的血糖可在24h内降至正常，48h内部分小鼠的血糖值有波动。移植成功后的小鼠血糖控制稳定，并可长时间维持血糖在正常水平（＞30d），与进口Sigma胶原酶分离的小鼠胰岛肾被膜下移植的结果无统计学差异（P＞0.05）。2.3移植后胰岛的组织学检查结果胰岛移植后第14天，取含胰岛的小鼠肾组织，经固定、包埋、切片后，进行HE染色和胰岛素免疫组化染色。由图3结果可知，糖尿病小鼠胰岛移植14d后，Insulin免疫组化染色显示肾被膜下较多阳性组织，说明该含中性蛋白酶的国产胶原酶组和Sigma胶原酶V组的胰岛细胞团在小鼠肾被膜下形态均较完整，活性良好，胰岛素分泌旺盛。3讨论胶原酶是溶组织梭菌的发酵产物，基于底物特异性和氨基酸分析，胶原酶的主要成分包括ColG和图2胰岛移植后小鼠的血糖变化结果3530-2302622181410622520151050血糖值(mmol/L)Sigma胶原酶V组国产胶原酶组移植后时间(d)糖尿病未移植组
混合，结合中性蛋白酶用于进行人胰岛的分离等，在胰岛分离的数量和完整度上均取得了很好的结果[15]。本实验研究了一种国产胶原酶，并结合中性蛋白酶，获得了数量较多、活性较好的小鼠胰岛细胞团，且体内移植的降血糖结果与Sigma胶原酶V的结果无差异。本研究可为该国产胶原酶的质量提升和替代进口胶原酶用于后续大动物胰岛分离的研究提供参考。参考文献：[1]LiX,MengQ,ZhangL,etal.Overcomingimmunobiologicalbarriersagainstporcineisletxenografts:whatshouldbedone?[J].Pancreas,2019,48(3):299-308.图3肾被膜下胰岛HE染色（×100）与免疫组化染色（×100）结果[2]PepperAR,BruniA,ShapiroAMJ.Clinicalislettransplanta-tion:isthefuturefinallynow?[J].CurrOpinOrganTrans-plant,2018,23(4):428-439.[3]ShapiroAM,PokrywczynskaM,RicordiC.Clinicalpancre-aticislettransplantation[J].NatRevEndocrinol,2017,13(5):268-277.[4]李玥,杨永强.胰岛分离纯化研究进展[J].中国修复重建外科志,2010,24(11):1392-1396.[5]FuHX,QiuKY,JiangX,etal.Isletdistributionindecellular-izedliverbioscaffoldsbyinfusionthroughtheportalvein[J].JBiomaterTissueEng,2017,7(5):348-354.[6]FuHX,WuLL,QiuKY,etal.Constructionandevaluationofislettransplantationunderkidneycapsuleinmouse[J].JBio-materTissueEng,2016,6(3):208-215.[7]叶丛丛,傅红兴,江玲,等.一种快速分离纯化小鼠胰岛的方法[J].肝胆胰外科杂志,2014,26(5):403-405.[8]LembertN,WescheJ,PetersenP,etal.Arealdensitymeasure-mentisaconvenientmethodforthedeterminationofporcineisletequivalentw
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌中性蛋白酶的研究进展[J]. 张晓燕,国立东,刘晓艳. 中国酿造. 2018(04)
[2]一种小鼠胰岛经门静脉肝内移植方法及疗效评价[J]. 蒋煊,傅红兴,邱凯燕,何云强,徐艳艳,祝青卉. 肝胆胰外科杂志. 2016(02)
[3]一种快速分离纯化小鼠胰岛的方法[J]. 叶丛丛,傅红兴,江玲,朱雁林,朱晶晶,崔晨威. 肝胆胰外科杂志. 2014(05)
[4]胰岛分离纯化研究进展[J]. 李玥,杨永强. 中国修复重建外科杂志. 2010(11)
本文编号：2899483
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