内质网应激通过SCAP/SREBP-1c调控L02肝细胞脂质合成代谢
发布时间：2020-12-06 03:41
目的在内质网应激状态下,观察SCAP/SREBP-1c对肝细胞脂质合成代谢的影响。方法用毒胡萝卜素（Tg）诱导人L02正常肝细胞株建立内质网应激模型,Western blot检测GRP78的蛋白表达。甘油三酯（TG）试剂盒和油红O染色检测肝细胞内脂变程度;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c下游脂代谢相关基因FAS、ACC1的mRNA表达情况,Western blot检测n SREBP-1c、FAS、ACC1的蛋白表达情况。通过miRNA瞬时转染沉默SCAP基因的表达,观察上述指标的变化情况。结果实验组GRP78蛋白的相对表达量与对照组比较,均显著增加（P<0.05）,Tg在体外成功建立肝细胞内质网应激模型。与空白对照组相比,Tg组肝细胞内甘油三酯含量明显增加（P<0.05）,脂滴明显增多;n SREBP-1c的蛋白水平明显升高（P<0.05）;下游靶基因FAS和ACC1的基因和蛋白水平均明显上调（P<0.05）,与n SREBP-1c的升高趋势一致。转染SCAP-3 miRNA载体后,以上指标均明显下调（P<0.05）。结论内质网应激通过SCAP/SR...
【文章来源】：第三军医大学学报. 2015年05期 第443-448页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
Westernblot检测各组L02肝细胞GＲP78蛋白的表达
0、12、24、48h图1Westernblot检测各组L02肝细胞GＲP78蛋白的表达2．2Westernblot检测SCAP-miＲNA对SCAP蛋白表达的影响与空白对照组的SCAP相对表达量(0．61±0．03)比较，阴性对照组(0．63±0．03)差异无显著性(P＞0.05)，而转染SCAP-3miＲNA(0．09±0．01)对SCAP蛋白表达的抑制作用最明显(P＜0．05)，因此在后续的实验中我们选用SCAP-3miＲNA。各组SCAP蛋白表达见图2。12345SCAP（150×103）→β蛳actin（43×103）→1:空白对照组;2:阴性质粒对照组;3:SCAP-1miＲNA;4:SCAP-2miＲNA;5:SCAP-3miＲNA图2Westernblot检测各组L02肝细胞SCAP蛋白的表达2．3SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞甘油三酯含量的影响Tg组和空白对照组相比，L02肝细胞内甘油三酯含量明显增加(P＜0．05)，表明EＲS可诱导肝细胞脂肪变性。与Tg组相比较，阴性质粒组的甘油三酯水平并没有明显改变(P＞0．05);而SCAP干扰质粒组的甘油三酯水平明显降低(P＜0．05)。说明干扰SCAP基因的表达，明显减少了肝细胞的甘油三酯合成，改善了EＲS引起的脂肪变。各组肝细胞甘油三酯含量见表1。表1各组L02肝细胞内甘油三酯含量(μg/mg，n=3，x珋±s)组别L02细胞空白对照组23．44±1．63Tg组39．35±1．71aSCAP阴性质粒+Tg组41．11±2．41SCAP干扰质粒+Tg组28．12±1．29ba:P＜0．05，与空白对照组比较;b:P＜0．05，与Tg组比较2．4SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内脂滴的影响Tg组与空白对照组相比较，L02肝细胞内可见大量红色脂滴，并伴有脂滴融合现象，进一步说明我们的EＲS模型诱导了肝细胞脂肪变性。与Tg组相比较，阴性质粒组细胞内脂滴未见明显减少，而SCAP干扰质粒组细胞内仅见少量红色脂滴，说明干扰SCAP明显减轻了EＲS所致的脂肪沉积
CDABA:空白对照组;B:Tg组;C:阴性质粒+Tg组;D:干扰质粒+Tg组图3油红O染色观察各组L02肝细胞内脂滴变化(×200)2．5SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内SＲEBP-1c下游脂代谢相关基因FAS、ACC1mＲNA表达的影响在mＲNA水平，以空白对照组的表达为1，经Tg处理48h后，L02肝细胞的FAS、ACC1的相对表达量明显增加(P＜0．05)。与Tg组相比较，转染阴性质粒后，两者并没有明显改变(P＞0．05);而转染SCAP-3miＲNA干扰质粒后，两者均明显减少(P＜0．05)。见图4。以上结果提示了EＲS上调SＲEBP-1c下游的脂代谢相关基因FAS、ACC1的mＲNA表达水平，而且SCAP-3miＲNA能下调EＲS所致的以上指标的变化。151050FASmRNA相对表达1234ab3210ACC1mRNA相对表达1234ab髿鬀组别组别1:空白对照组;2:Tg组;3:阴性质粒+Tg组;4:干扰质粒+Tg组a:P＜0．05，与空白对照组比较;b:P＜0．05，与Tg组比较图4实时荧光定量PCＲ法检测各组L02肝细胞FAS(A)、ACC1(B)的mＲNA表达2．6SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内nSＲEBP-1c、FAS、ACC1蛋白表达的影响在蛋白水平，Tg组与对照组相比，L02肝细胞nSＲEBP-1c蛋白的表达明显升高(P＜0．05);转染SCAP干扰质粒后，nSＲEBP-1c蛋白的表达明显降低(P＜0．05)，而阴性质粒转染组并没有明显降低(P＞0．05)。同时，我们检测了各组肝细胞FAS、ACC1蛋白的表达情况，发现Tg组FAS、ACC1表达显著上调(P＜0．05)，在转染后亦明显降低(P＜0．05)，阴性质粒组均无明显改变(P＞0．05)，与nSＲEBP-1c蛋白趋势一致(图5，表2)。结果证实，干扰SCAP，不仅能抑制EＲS状态所引起的nSＲEBP-1c蛋白的表达增多，而且能够下调其下游的脂代谢相关基因FAS、ACC1的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Xue-Qun Zhang,Cheng-Fu Xu,Chao-Hui Yu,Wei-Xing Chen,You-Ming Li. World Journal of Gastroenterology. 2014(07)
[2]内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制[J]. 万颖,房殿亮,沈薇,宁波. 第二军医大学学报. 2012(10)
[3]Maintaining cholesterol homeostasis: Sterol regulatory element-binding proteins[J]. Lutz W.Weber,554 Mariner Point Drive,Clinton,TN 37716,USA Meinrad Boll,Andreas Stampfl,Institute for Toxicology,GSF-National Research Center for Environment and Health,Munich,D85758 Neuherberg,Germany. World Journal of Gastroenterology. 2004(21)
本文编号：2900653
【文章来源】：第三军医大学学报. 2015年05期 第443-448页 北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
Westernblot检测各组L02肝细胞GＲP78蛋白的表达
0、12、24、48h图1Westernblot检测各组L02肝细胞GＲP78蛋白的表达2．2Westernblot检测SCAP-miＲNA对SCAP蛋白表达的影响与空白对照组的SCAP相对表达量(0．61±0．03)比较，阴性对照组(0．63±0．03)差异无显著性(P＞0.05)，而转染SCAP-3miＲNA(0．09±0．01)对SCAP蛋白表达的抑制作用最明显(P＜0．05)，因此在后续的实验中我们选用SCAP-3miＲNA。各组SCAP蛋白表达见图2。12345SCAP（150×103）→β蛳actin（43×103）→1:空白对照组;2:阴性质粒对照组;3:SCAP-1miＲNA;4:SCAP-2miＲNA;5:SCAP-3miＲNA图2Westernblot检测各组L02肝细胞SCAP蛋白的表达2．3SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞甘油三酯含量的影响Tg组和空白对照组相比，L02肝细胞内甘油三酯含量明显增加(P＜0．05)，表明EＲS可诱导肝细胞脂肪变性。与Tg组相比较，阴性质粒组的甘油三酯水平并没有明显改变(P＞0．05);而SCAP干扰质粒组的甘油三酯水平明显降低(P＜0．05)。说明干扰SCAP基因的表达，明显减少了肝细胞的甘油三酯合成，改善了EＲS引起的脂肪变。各组肝细胞甘油三酯含量见表1。表1各组L02肝细胞内甘油三酯含量(μg/mg，n=3，x珋±s)组别L02细胞空白对照组23．44±1．63Tg组39．35±1．71aSCAP阴性质粒+Tg组41．11±2．41SCAP干扰质粒+Tg组28．12±1．29ba:P＜0．05，与空白对照组比较;b:P＜0．05，与Tg组比较2．4SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内脂滴的影响Tg组与空白对照组相比较，L02肝细胞内可见大量红色脂滴，并伴有脂滴融合现象，进一步说明我们的EＲS模型诱导了肝细胞脂肪变性。与Tg组相比较，阴性质粒组细胞内脂滴未见明显减少，而SCAP干扰质粒组细胞内仅见少量红色脂滴，说明干扰SCAP明显减轻了EＲS所致的脂肪沉积
CDABA:空白对照组;B:Tg组;C:阴性质粒+Tg组;D:干扰质粒+Tg组图3油红O染色观察各组L02肝细胞内脂滴变化(×200)2．5SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内SＲEBP-1c下游脂代谢相关基因FAS、ACC1mＲNA表达的影响在mＲNA水平，以空白对照组的表达为1，经Tg处理48h后，L02肝细胞的FAS、ACC1的相对表达量明显增加(P＜0．05)。与Tg组相比较，转染阴性质粒后，两者并没有明显改变(P＞0．05);而转染SCAP-3miＲNA干扰质粒后，两者均明显减少(P＜0．05)。见图4。以上结果提示了EＲS上调SＲEBP-1c下游的脂代谢相关基因FAS、ACC1的mＲNA表达水平，而且SCAP-3miＲNA能下调EＲS所致的以上指标的变化。151050FASmRNA相对表达1234ab3210ACC1mRNA相对表达1234ab髿鬀组别组别1:空白对照组;2:Tg组;3:阴性质粒+Tg组;4:干扰质粒+Tg组a:P＜0．05，与空白对照组比较;b:P＜0．05，与Tg组比较图4实时荧光定量PCＲ法检测各组L02肝细胞FAS(A)、ACC1(B)的mＲNA表达2．6SCAP-3miＲNA对EＲS状态下L02肝细胞内nSＲEBP-1c、FAS、ACC1蛋白表达的影响在蛋白水平，Tg组与对照组相比，L02肝细胞nSＲEBP-1c蛋白的表达明显升高(P＜0．05);转染SCAP干扰质粒后，nSＲEBP-1c蛋白的表达明显降低(P＜0．05)，而阴性质粒转染组并没有明显降低(P＞0．05)。同时，我们检测了各组肝细胞FAS、ACC1蛋白的表达情况，发现Tg组FAS、ACC1表达显著上调(P＜0．05)，在转染后亦明显降低(P＜0．05)，阴性质粒组均无明显改变(P＞0．05)，与nSＲEBP-1c蛋白趋势一致(图5，表2)。结果证实，干扰SCAP，不仅能抑制EＲS状态所引起的nSＲEBP-1c蛋白的表达增多，而且能够下调其下游的脂代谢相关基因FAS、ACC1的
【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of endoplasmic reticulum stress in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Xue-Qun Zhang,Cheng-Fu Xu,Chao-Hui Yu,Wei-Xing Chen,You-Ming Li. World Journal of Gastroenterology. 2014(07)
[2]内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制[J]. 万颖,房殿亮,沈薇,宁波. 第二军医大学学报. 2012(10)
[3]Maintaining cholesterol homeostasis: Sterol regulatory element-binding proteins[J]. Lutz W.Weber,554 Mariner Point Drive,Clinton,TN 37716,USA Meinrad Boll,Andreas Stampfl,Institute for Toxicology,GSF-National Research Center for Environment and Health,Munich,D85758 Neuherberg,Germany. World Journal of Gastroenterology. 2004(21)
本文编号：2900653
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