耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因的分子流行病学研究

发布时间：2017-04-07 18:16

  本文关键词：耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因的分子流行病学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：耐多药(Multi-drug Resistant,MDR)结核菌是指结核菌至少同时对利福平(Rifampicin, RIF)和异烟肼(Isoniazid,INH)两种一线抗结核药物发生耐药。我国耐多药结核病患者比例很高,约为9.3%,是世界平均水平的2倍左右。耐多药结核病相比较于普通结核病防控难度高、治疗难度大、治愈率低且药物副作用大。 耐多药结核病的防治最关键的是如何在早期快速、准确的诊断出结核菌的耐药性。基于固体培养基培养的传统药敏实验方法虽具有较高的准确性,但需较长时间,一般1-2月,患者可能因此耽误最佳的治疗时机；近年来新发展的基于液体培养基培养的药敏实验方法虽需时间较短,但由于其依赖于昂贵的仪器,因此使适用地区受到限制;分子生物学技术的迅猛发展,市场上出现了一批结核菌耐药性的快速诊断工具,这些工具的应用使得简便且快速检测出结核菌的耐药性成为可能。由于不同地区流行菌株的主要突变类型和突变频率不同,这些产品在不同的地区使用时的灵敏度不同,因此在某些地区会出现灵敏度较低的缺陷。 本研究的目的是,研究中国不同地区结核分枝杆菌耐药相关基因的优势突变位点和突变频率,有利于适用于不同地区的分子生物学诊断产品的开发,能够快速、准确的预测结核菌的耐药性。 本研究分为两部分,第一部分为从北京、上海和广西三个地区共收集约380株耐多药结核分枝杆菌,药敏实验获得各菌株对四种一线药物的耐药结果,并且提取基因组DNA,对三地区MDR菌株基因组DNA样本进行乙胺丁醇耐药相关基因embB扩增并测序以及北京型/非北京型(RD105,DTM-PCR)基因分型；第二部分为对上海地区MDR菌株基因组DNA样本进行异烟肼耐药相关基因katG基因编码区全长扩增并测序,获得katG基因的突变特征。 本研究发现,第一部分中：(1)北京型菌株是耐多药结核分枝杆菌的主要流行株；北京型和非北京型菌株的比例存在地域分布上的差异；(2)不同地区MDR菌株的embB基因突变特征存在一定程度的差异,即不同突变位点比例在不同地区不同。(3)仅仅依靠embB306来预测乙胺丁醇的耐药性是不够的,尤其在本研究中的广西地区预测灵敏度极低,仅能预测36.8%；因此提示在不同地区采用不同的多位点组合来预测MDR菌株乙胺丁醇耐药性,可以提高灵敏度。 第二部分中：(1)除katG315之外的katG基因编码区其他突变位点可能在异烟肼耐药分子机制中存在作用,但仍需在更大样本的菌株群体中和通过体外遗传操作来验证。 (2)对于MDR菌株异烟肼耐药性的预测,通过检测katG基因编码区全长的突变可以获得与检测多个基因突变相似的高灵敏度。
【关键词】：结核菌 耐多药 耐药相关基因突变 基因分型
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3416
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 引言8-14
• 实验材料与方法14-23
• 一、实验材料14-15
• 1. 实验仪器14
• 2. 实验材料14
• 3. 溶液配制14-15
• 4. 培养基配制15
• 二、实验方法15-23
• 实验结果23-52
• 第一部分 耐多药结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因embB突变研究23-49
• 1. 耐多药菌株和药物敏感菌株(对照)样本的组成23
• 2. 耐多药菌株的药敏实验结果23-37
• 3. 耐多药菌株的北京型/非北京型(RD105)基因分型结果37-38
• 4. 耐多药菌株中北京型/非北京型与乙胺丁醇耐药性关系38-39
• 5. 耐多药菌株的乙胺丁醇耐药相关基因embB基因的突变结果39-49
• 第二部分 耐多药结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG突变研究49-52
• 1. 耐多药菌株和药物敏感菌株(对照)样本的组成49
• 2. 异烟肼耐药菌株和敏感菌株katG基因突变概况49-51
• 3. 异烟肼耐药菌株katG基因突变类型和频率51-52
• 讨论52-59
• 全文总结59-60
• 参考文献60-65
• 发表文章65-66
• 致谢66-67

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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3 盛喜玲;赵玉玲;;结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变的研究[J];中国卫生检验杂志;2013年11期

4 李强;卢洪洲;;耐多药结核及泛耐药结核诊治的新认识[J];诊断学理论与实践;2015年01期

5 崔明全;吴辰斌;汪洋;沈建忠;吴聪明;;耐氟喹诺酮类药物空肠弯曲菌HRM快速检测方法的建立[J];中国兽医科学;2015年05期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 李桂莲;天津市耐药结核病危险因素及结核分枝杆菌耐药分子机制研究[D];天津医科大学;2010年

2 米贤文;新型噬菌体压电传感器快速检测结核分枝杆菌的机理及其药敏应用效果的研究[D];湖南大学;2013年

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中国硕士学位论文全文数据库 前1条

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本文编号：291045