粘质沙雷氏菌在太空飞行后变化的初步研究

发布时间：2020-12-15 09:18

　　目的:细菌会随着人类或航天器部件进入太空，有研究表明细菌在空间环境作用下毒力增强，然而，关于这一效应的普遍性及机制尚未完全阐明。粘质沙雷氏菌是一种常见的临床条件致病菌，曾在空间站多次检出。本研究利用神舟八号飞船搭载的机会，采用表型研究相关实验，并利用比较基因组学、转录组学以及蛋白质组学的生物信息学方法探索粘质沙雷氏菌经历了空间飞行环境作用后的变化，并初步探讨其机制。方法：（1）粘质沙雷氏菌通过神舟八号飞船搭载获得空间飞行实验组，地面设同步温度对照组,实验组及对照组均经过16SrDNA进一步验证。（2）通过革兰氏染色、纸片法耐药实验、溶血实验、生长曲线测定，Biolog法对空间飞行粘质沙雷氏菌株和地面对照菌株进行形态、耐药性、溶血性、生长速率、生化代谢谱的观察比较，明确空间飞行株的生物学特性，并获得粘质沙雷氏菌变异株LCT-SM166、LCT-SM262、地面对照株为LCT-SM213。（3）采用高通量Illumina测序技术对样品LCT-SM166、LCT-SM262、LCT-SM213进行Paired-End测序。对产出的数据进行De novo组装,并进行基因预测及注释分析。对空间变... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

搭载装置

图 2 搭载样品包.菌株的培养和保存.1.培养基配制：配制 LB 固体培养基 6L，调节 PH 7.0~7.2，121℃高压蒸汽灭菌 20min。灭后，从灭菌锅中取出培养基，冷却至 50~60℃，开始在生物安全柜中倒平板约 20ml 培养基 个平板，总共倒 300 个平板用于稀释涂布。在生物安全柜置 1d，备用。*LB 配方：胰蛋白胨 10g，酵母粉 5g，氯化钠 10g，琼脂 17g。.2.稀释涂布：对原样品进行从 10-1到 10-6梯度稀释，选择 10-2、10-4，10-6进行涂布，每释度п个重复，分别取 100ul 各稀释度菌悬液涂布于 LB 平板р，于 37℃培中倒置培养。培养至 20h 后，取出平板，选出菌落分布比较合适的平板，每品选择 2~5 个平板，每个平板选择п同形态的菌落（相同形态的菌落选择 3

面：好号的平板按顺序摆放，同时将平板р单菌落的编号 式п份的竹签挑取对应编号的单菌落在斜面р进行划线，每个单菌，化完斜面后将其放置在 37℃培养箱中进行培养 18~24h，每 支进行 16s rDNA 扩增测序，另外两支放在 4℃冰箱保藏。 16s rDNA 鉴定实验流程增 16S rDNA：DNA 是 16S rRNA 序列的基因，长约 1.5kb。将已分纯的单菌直16S rDNA，部分通过菌液 PCR 较难扩增的单菌经扩大培养后提扩增所用引物序列如н： AGAGTTTGATCATGGCTCAG TAGGGTTACCTTGTTACGACTT的高保真 LA Taq 酶扩增得到高质量 PCR 产物。如图 3：

【参考文献】：
期刊论文
[1]空间生命科学研究与展望[J]. 郭英华,刘长庭.  解放军医学杂志. 2011(04)
[2]模拟微重力对肺微血管内皮细胞窖蛋白-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响[J]. 康春燕,袁明,邹琳,章烨,李天志,王俊锋,刘长庭.  解放军医学杂志. 2010(11)
[3]模拟微重力对人肺微血管内皮细胞凋亡的影响[J]. 康春燕,刘长庭,邹琳,袁明,章烨,李天志,王洋,王德龙,刘岩.  解放军医学杂志. 2010(11)



本文编号：2918041