hVEGF 121 /EGFP融合蛋白的表达、纯化及功能鉴定

发布时间：2020-12-16 22:57

　　目的:用携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的人血管内皮细胞生长因子121 （hVGF121）的真核质粒转染骨髓间充质干细胞（BMCs）,观察其表达,并检测融合蛋白对细胞增殖和血管通透性的影响。方法:扩增已构建的pEGFP-N2-hVEGF121重组质粒,脂质体法转染BMCs;荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;Western Blot检测VEGF蛋白的表达; MTT实验和miles试验分别检测融合蛋白对细胞增殖和血管通透性的影响。结果:pEGFP-N2-hVEGF121成功转染入骨髓间充质干细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达, Westen Blot检测到VEGF蛋白的表达。MTT试验证实融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖,与对照组相比有显著性差异（P < 0.05）。Miles试验证实融合蛋白能够增加血管壁的通透性。结论:重组质粒pEGFP-N2-hVEGF121体外转染入骨髓间充质干细胞后,目的基因能够在细胞有效表达,检测方法简便可靠。融合蛋白在体外具有野生型VEGF的功能。本实验为利用转染该种目的基因的骨髓间充质干细胞进行心血管疾病的研究提供了理论支持。 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

流式细胞仪检测细胞表面标记物，CD29呈阳性表达－Ｄ３４ＣＦＩＴＣ１１０１００１０００1ＣＤ２９－ＰＥ

图 1A 培养骨髓间充质干细胞（×200）1B 流式细胞仪检测细胞表面标记物，CD29 呈阳性－Ｄ３４ＣＦＩＴＣ１ １０ １００ １０００１０００100101ＣＤ２９－ＰＥ

空脂质体转染MSCs


本文编号：2920929