RIP3对BCG感染后小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用研究

发布时间：2020-12-19 11:35

　　目的:探讨受体相互作用蛋白3（RIP3）在卡介苗（BCG）诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡过程中的调控作用。方法:构建RIP3腺病毒干扰载体并感染巨噬细胞,并用BCG进行感染。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;利用流式细胞术对细胞凋亡率、线粒体膜电位及活性氧含量进行检测;通过Western blot检测RIP3及凋亡相关蛋白的表达水平。结果:BCG感染RAW264.7细胞后,细胞活力下降且RIP3蛋白表达量显著上调（P<0.01）。而与BCG单独感染组相比,BCG感染结合RIP3干扰处理组细胞凋亡率及活性氧含量降低,线粒体膜电位升高,同时促凋亡蛋白Bax与cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著降低（P<0.01）。结论:在BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的过程中,RIP3参与了BCG诱导的RAW264.7细胞的凋亡,且该过程可能是通过线粒体途径实现的。 

【文章来源】：中国病理生理杂志. 2019年07期 北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
材 料 和 方 法
    1 细胞系与菌株
    2 主要材料和试剂
    3 方法
        3.1 细胞培养
        3.2 菌株培养
        3.3 实验分组
        3.4 MTT法检测细胞存活率
        3.5 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率
        3.6 RAW264.7细胞ROS水平的测定
        3.7 RAW264.7细胞线粒体膜电位的检测
        3.8 Western blot 检测蛋白表达
    4 统计学处理
结 果
    1 BCG感染对RAW264.7细胞活力的影响
    2 BCG感染 RAW264.7细胞后RIP3表达水平的变化及RIP3腺病毒干扰载体的验证
    3 RIP3对 BCG感染后RAW264.7细胞凋亡率的影响
    4 RIP3对BCG感染后RAW264.7细胞活性氧水平的影响
    5 RIP3对BCG感染后RAW264.7细胞线粒体膜电位的影响
    6 RIP3对BCG感染后RAW264.7细胞凋亡相关分子蛋白水平的影响
讨 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠巨噬细胞内表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对细胞增殖和凋亡的影响[J]. 任琳,李轶,王山梅,师娟,郭思.  中国病理生理杂志. 2013(10)
[2]凋亡与肿瘤及其治疗进展[J]. 周彩虹,黄启福.  中国病理生理杂志. 2004(11)

博士论文
[1]Wnt/β-catenin信号对巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染的免疫调控机制研究[D]. 吴晓玲.宁夏大学 2014



本文编号：2925832