限制性显示（RD）技术在HIV感染早期诊断基因芯片中的应用

发布时间：2020-12-27 05:59

　　人免疫缺陷病毒（HIV）感染所引起的艾滋病由于其高度的危害性而受到人们的广泛关注，早期诊断迫在眉睫。艾滋病的诊断不仅需要检测到HIV的存在，并对其进行基因分型，而且也要对艾滋病发病过程中合并的感染进行监测。近年来国际上兴起的一种基因检测新技术——DNA芯片技术，为艾滋病的早期诊断提供了一种快速、高效、敏感、经济、自动化的方法，可以同时进行HIV基因的检测和分型。 DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸探针或者直接将大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，得出样品的基因序列及其表达的信息。DNA芯片可分为原位合成芯片和DNA微集阵列两大类，其中DNA微集阵列的制作未受到严格的专利保护，因此为众多的研究机构所推崇而发展迅速。DNA微集阵列技术的关键是探针的制备与样品的标记、杂交。本文应用马文丽、郑文岭等建立的限制性显示（Restriction Display，简称为RD）技术，快速分离大量有序的基因片段制备DNA芯片探针；并将其巧妙地应用于基因芯片的样品标记与杂交过程，大大提高了杂交的效率。 实验中首先利用... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HIV-1四个亚型质粒DNA的限制性酶切分析

2.RD图谱以通用引物及延伸一个碱基的分组引物进行n组RD反应，各组产物各取2pl，进行2%琼脂糖电泳，可见清晰分辨的的RD图谱(图1一4)。其中通用引物组UU(第1道)中扩增的条带并不多。AA(第2道)、AC(第4道)、TT组(第6道)与预期大致相符;两个大片段(Al’-1081、TT-1610)均未扩增出来;而AT、TC组中出现几条大小与TT组相近的片段;TG组理论上无片段，而出现的片段与TT组相似;AG、CC、CG、GG组隐约有几条片段(注:图中片段的大小减去32bp的接头长等于预期片段长度)。以TT组为例，该组中自上至下有五条带，以TTI一5表示。~2000~1000~750~500~250~100图1一4HIVIU26942基因的RD图谱Fig.1一4RDPatternofHIVgenesfromfoursubtyPes.l一11:PCRsubgrouPsofUU，AA、Al，、AC、AG、T’T、TC、TG、CC、CG、GG;M:DNAmarkerDL20OO.

3.克隆鉴定在涂有TT组转化液的平板上，随机挑选24个白色菌斑，PCR扩增后，以2%琼脂糖凝胶电泳，得到了TT组的各种片段(图1一5):克隆片段13、14、15与TTI相似;20、21与TTZ对应;16、18等对应TT3;11、12等对应TT4;10对应TTS。bPM101112131415161718192021刀23别200010000nU00气Jn‘JO7者一、︺21图1一5克隆片段的2%琼脂糖凝胶电泳分析Fig.1一5TheZ%agarosegeleleetroPhoretieanalysisofeloningfragmentsamPlifiedbyPCR.10一24:elonenumbers:M:DNAmarkerDL200O4.RD片段的扩增以B亚型TT、TC、AT、AC组的阳性克隆质粒为模板，扩增得到单一片段(图1一6)。(a)MAAA】，OOC﹃日︺nn︸O︸I︶n︸︶Inz，了‘J21


本文编号：2941222