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荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型

发布时间:2021-01-07 18:15
  目的:建立稳定表达荧光素酶的小鼠结肠癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通过基因重组的方式,将外源基因插入到逆转录病毒载体上,以工具细胞293T包毒后得到病毒,将携带荧光素酶基因的质粒转染到小鼠结肠癌细胞株CT26中,Puromycin筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果:获得了高水平稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系CT26具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于BALB/c鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论:成功建立了稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的BALB/c鼠皮下结肠癌移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。 

【文章来源】:中国免疫学杂志. 2019,35(17)北大核心

【文章页数】:6 页

【部分图文】:

荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型


CT26细胞系中稳定过表达LUC的细胞株扩增培养后复苏验证(×100)

细胞克隆,荧光素酶,细胞,活体


蟾此昭橹?×100)Fig.1ConfirmationofresuscitationafterexpansionofCT26celllinestablyoverexpressingLUC(×100)Note:A.CT26-WT;B.CT26-LUC1.种开始就能很好地反映肿瘤的生长,由此成功建立荧光素酶标记的小鼠结肠癌细胞活体成像移植瘤模型。CT26-LUC1细胞移植瘤镜下癌细胞排列呈团索状,大小形态各异,胞浆丰富,细胞核大深染,局部未染色可见坏死。与CT26-WT对照细胞没有差别(图4C),符合结肠癌组织细胞特征,可见慢病毒转染荧光素酶基因对肿瘤细胞组织形态学无显著影响。图2CT26-LUC1细胞克隆体外荧光活性检测Fig.2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.***.P<0.001.图3CT26-LUC1细胞与CT26-WT细胞生长特性的比较(x±s)Fig.3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.罗华灶等荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型第17期·9012·

细胞,细胞特征,慢病毒,结肠癌组织


4C),符合结肠癌组织细胞特征,可见慢病毒转染荧光素酶基因对肿瘤细胞组织形态学无显著影响。图2CT26-LUC1细胞克隆体外荧光活性检测Fig.2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.***.P<0.001.图3CT26-LUC1细胞与CT26-WT细胞生长特性的比较(x±s)Fig.3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.罗华灶等荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型第17期·9012·

【参考文献】:
期刊论文
[1]PD-L1在恶性肿瘤中的表达及研究进展[J]. 高建华,王加营,叶晓锋.  中国免疫学杂志. 2017(12)



本文编号:2963014

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