探索进展型EAE小鼠中枢神经系统不同部位的组织病理学和小胶质细胞的动态变化
发布时间：2021-01-18 18:15
目的建立进展型实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,观察中枢神经系统（central nervous system,CNS）不同部位在病变不同阶段的组织病理学变化以及M1型、M2型小胶质细胞的动态变化。方法以C57BL/6为实验小鼠,建立EAE模型,于不同发病时期对CNS各部位进行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）检测髓鞘脱失、苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色检测炎细胞浸润;免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）检测M1型、M2型小胶质细胞的动态变化;Real-Time PCR检测腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。结果 LFB和HE染色结果显示EAE小鼠CNS各部位均于发病点出现髓鞘脱失和炎细胞浸润,且随疾病进展逐渐加重。IHC结果显示,M1型小胶质细胞浸润随疾病进展不断增加;M2型浸润先增加后减少。Real-Time PCR结果显示,iNOS,TNF-α的mRNA水平随疾病进展逐渐增加;A...
【文章来源】：世界科学技术-中医药现代化. 2019,21(07)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位髓鞘染色结果（50×）
2019第二十一卷第七期★Vol.21No.7〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕应条件为：首先热变性，95℃30s；扩增40个循环，95℃5s，60℃退火10s；溶解条件，95℃15s，60℃1min，95℃5s。1.3统计学分析用SPSS18.0软件对数据进行统计分析。数据表示为平均值±标准差，采用单向Anova分析组间差异。认为P<0.05差异具有统计学意义。2实验结果2.1临床评分临床评分结果（图1），EAE小鼠于造模后第14天开始发病，于Day24到达高峰期，随后病情稍有好转，进入慢性持续期，临床评分维持在3分左右。2.2LFB染色结果LFB染色结果显示正常小鼠脊髓白质均匀呈深蓝色，白质与灰质的界限清晰可见；在模型组中，脊髓白质区域染色不均，出现白斑区域，髓鞘脱失（图2）。随着疾病的发展，小鼠脊髓不同部位的髓鞘脱落逐渐严重；同时期以腰髓段的髓鞘脱失最严重。2.3HE染色结果HE染色结果显示，正常组小鼠CNS各部位着色均匀，组织排列正常，无炎细胞浸润；在各模型组中，炎细图2进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位髓鞘染色结果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭头所指表示髓鞘脱失部位图1进展型EAE小鼠临床评分1446
世界科学技术—中医药现代化★思路与方法〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕胞出现，并逐渐渗透至血管周围，甚至灰质部位出现血管“袖套样”浸润（图3）。在进展型EAE的发病过程中，小鼠CNS各部位炎细胞浸润均于发病点出现，随疾病进展逐渐加重，于慢性持续期趋于稳定。同一时期不同发病部位的炎细胞浸润程度略有差异，相对于大脑和脑干，脊髓部位的炎细胞浸润更为严重。2.4M1型小胶质细胞变化以iNOS特异性标记小鼠CNS中M1型小胶质细胞。IHC结果显示，正常组小鼠CNS各部位有少量的M1型小胶质细胞；模型组小鼠CNS各部位均发现大量M1型小胶质细胞浸润。在EAE发病后的四个时间点，M1型小胶质细胞数量逐渐增加；相对大脑和脑干，脊髓部位的M1型小胶质细胞数量更多，其中以腰髓段最多（图4）。2.5M2型小胶质细胞变化以Arg-1特异性标记小鼠CNS中M2型小胶质细胞。IHC结果显示，在EAE模型小鼠的发病过程中，CNS各部位的M2型小胶质细胞数量先增加后减少，它在发病高峰时达到最大值，并在慢性持续时间内显著下降。从病变部位来看，脊髓中M2型小胶质细胞数图3进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位HE染色结果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭头所指表示炎细胞浸润部位1447
【参考文献】：
期刊论文
[1]实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠脾和中枢神经系统中CD4+T细胞的动态变化[J]. 罗会,郭晴晴,吕爱平,何小鹃,马超英. 动物医学进展. 2018(07)
[2]基于极速成像技术的原发性高血压患者脉象客观化研究[J]. 许轶君,高东雯,肖沪生,徐芳. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(07)
[3]C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立的关键性问题[J]. 吴彦青,郭玉红,刘清泉. 世界中医药. 2017(04)
[4]小胶质细胞介导多发性硬化发病的机制研究进展[J]. 梁湘辉,朱文浩,高颖. 现代中西医结合杂志. 2015(27)
[5]超声极速成像技术评价维持性血液透析患者颈动脉脉搏波传导速度的临床研究[J]. 张蕾,勇强,程虹,卞维静,王明月,张依然. 中国血液净化. 2015(04)
[6]同步WI及脉象技术评估原发性高血压不同病理阶段血管弹性的研究[J]. 许轶君,肖沪生,徐芳. 上海中医药大学学报. 2015(02)
[7]实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点[J]. 张健,曾育琦,张静,康德勇,黄天文,陈晓春. 福建医科大学学报. 2015(01)
[8]极速成像技术检测的脉搏波传导速度与颈动脉硬化相关性的研究[J]. 邱兰燕,钱林学,刘冬,张宏,胡向东,任晓转,梁思. 中华超声影像学杂志. 2014 (03)
[9]超声无创技术评价颈动脉粥样硬化斑块的研究进展[J]. 朱宇,卓忠雄. 临床超声医学杂志. 2012(09)
[10]颈动脉粥样斑块及内中膜厚度与冠心病的关系[J]. 周慧青,孙宁玲,杨松娜,王伟民,刘美贞,胡恒慧. 高血压杂志. 2000(04)
硕士论文
[1]基于调控小胶质细胞极化探讨片仔癀对进展型EAE的治疗作用[D]. 罗会.西南交通大学 2018
[2]C57BL/6小鼠EAE模型CNS中IBA1、IL-10及IL-1β的动态表达及其发病机制的探讨[D]. 曾红.南昌大学 2016
本文编号：2985411
【文章来源】：世界科学技术-中医药现代化. 2019,21(07)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位髓鞘染色结果（50×）
2019第二十一卷第七期★Vol.21No.7〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕应条件为：首先热变性，95℃30s；扩增40个循环，95℃5s，60℃退火10s；溶解条件，95℃15s，60℃1min，95℃5s。1.3统计学分析用SPSS18.0软件对数据进行统计分析。数据表示为平均值±标准差，采用单向Anova分析组间差异。认为P<0.05差异具有统计学意义。2实验结果2.1临床评分临床评分结果（图1），EAE小鼠于造模后第14天开始发病，于Day24到达高峰期，随后病情稍有好转，进入慢性持续期，临床评分维持在3分左右。2.2LFB染色结果LFB染色结果显示正常小鼠脊髓白质均匀呈深蓝色，白质与灰质的界限清晰可见；在模型组中，脊髓白质区域染色不均，出现白斑区域，髓鞘脱失（图2）。随着疾病的发展，小鼠脊髓不同部位的髓鞘脱落逐渐严重；同时期以腰髓段的髓鞘脱失最严重。2.3HE染色结果HE染色结果显示，正常组小鼠CNS各部位着色均匀，组织排列正常，无炎细胞浸润；在各模型组中，炎细图2进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位髓鞘染色结果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭头所指表示髓鞘脱失部位图1进展型EAE小鼠临床评分1446
世界科学技术—中医药现代化★思路与方法〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕胞出现，并逐渐渗透至血管周围，甚至灰质部位出现血管“袖套样”浸润（图3）。在进展型EAE的发病过程中，小鼠CNS各部位炎细胞浸润均于发病点出现，随疾病进展逐渐加重，于慢性持续期趋于稳定。同一时期不同发病部位的炎细胞浸润程度略有差异，相对于大脑和脑干，脊髓部位的炎细胞浸润更为严重。2.4M1型小胶质细胞变化以iNOS特异性标记小鼠CNS中M1型小胶质细胞。IHC结果显示，正常组小鼠CNS各部位有少量的M1型小胶质细胞；模型组小鼠CNS各部位均发现大量M1型小胶质细胞浸润。在EAE发病后的四个时间点，M1型小胶质细胞数量逐渐增加；相对大脑和脑干，脊髓部位的M1型小胶质细胞数量更多，其中以腰髓段最多（图4）。2.5M2型小胶质细胞变化以Arg-1特异性标记小鼠CNS中M2型小胶质细胞。IHC结果显示，在EAE模型小鼠的发病过程中，CNS各部位的M2型小胶质细胞数量先增加后减少，它在发病高峰时达到最大值，并在慢性持续时间内显著下降。从病变部位来看，脊髓中M2型小胶质细胞数图3进展型EAE小鼠不同时间点CNS不同部位HE染色结果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭头所指表示炎细胞浸润部位1447
【参考文献】：
期刊论文
[1]实验性自身免疫性脑脊髓炎模型小鼠脾和中枢神经系统中CD4+T细胞的动态变化[J]. 罗会,郭晴晴,吕爱平,何小鹃,马超英. 动物医学进展. 2018(07)
[2]基于极速成像技术的原发性高血压患者脉象客观化研究[J]. 许轶君,高东雯,肖沪生,徐芳. 世界科学技术-中医药现代化. 2018(07)
[3]C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立的关键性问题[J]. 吴彦青,郭玉红,刘清泉. 世界中医药. 2017(04)
[4]小胶质细胞介导多发性硬化发病的机制研究进展[J]. 梁湘辉,朱文浩,高颖. 现代中西医结合杂志. 2015(27)
[5]超声极速成像技术评价维持性血液透析患者颈动脉脉搏波传导速度的临床研究[J]. 张蕾,勇强,程虹,卞维静,王明月,张依然. 中国血液净化. 2015(04)
[6]同步WI及脉象技术评估原发性高血压不同病理阶段血管弹性的研究[J]. 许轶君,肖沪生,徐芳. 上海中医药大学学报. 2015(02)
[7]实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点[J]. 张健,曾育琦,张静,康德勇,黄天文,陈晓春. 福建医科大学学报. 2015(01)
[8]极速成像技术检测的脉搏波传导速度与颈动脉硬化相关性的研究[J]. 邱兰燕,钱林学,刘冬,张宏,胡向东,任晓转,梁思. 中华超声影像学杂志. 2014 (03)
[9]超声无创技术评价颈动脉粥样硬化斑块的研究进展[J]. 朱宇,卓忠雄. 临床超声医学杂志. 2012(09)
[10]颈动脉粥样斑块及内中膜厚度与冠心病的关系[J]. 周慧青,孙宁玲,杨松娜,王伟民,刘美贞,胡恒慧. 高血压杂志. 2000(04)
硕士论文
[1]基于调控小胶质细胞极化探讨片仔癀对进展型EAE的治疗作用[D]. 罗会.西南交通大学 2018
[2]C57BL/6小鼠EAE模型CNS中IBA1、IL-10及IL-1β的动态表达及其发病机制的探讨[D]. 曾红.南昌大学 2016
本文编号：2985411
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