紫杉醇通过miR-140调节TGF-β1/Smad3通路及其抗肺纤维化的机制研究

发布时间：2021-01-20 01:59

　　目的研究紫杉醇（PTX）通过miR-140对TGF-β1/Smad3信号通路的调控作用,探讨PTX抗肺纤维化的作用机制。方法A549细胞和原代肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）,用TGF-β1（5ng/mL）培养72h诱导上皮细胞向间充质细胞转化（EMT）,建立肺纤维化细胞模型,用低浓度PTX （10nM,50nM）和（或）转染miR-140加以干预。透射电镜观察细胞超微结构变化,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测vimentin、E-cadherin和特异性肺表面活性蛋白C （SP-C）的表达变化,流式细胞仪测定细胞转染率。SD大鼠,经气管注入博来霉素（BLM）建立肺纤维化动物模型,BLM注入后第15天开始加PTX （0.6mg/kg·d-1）干预,HE及Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白,酸水解法检测羟脯氨酸,免疫组化法检测Smad3、p-Smad3和α-SMA表达。Western blot及real-time RT-PCR检测vimentin、 E-cadherin、α-SMA、Smad3和p-Smad3等蛋白和mRNA的表达,]-eal-time R... 

【文章来源】：滨州医学院山东省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代AECII的细胞形态学和SP-C检测（bar=150inupper,50inlower)

滨州医学院硕士学位论文 肺组织HE、MASSON染色观察：Od及sham组的肺组织结构未见明显异常。BLM7d组，可见肺泡上皮细胞损伤、变性，肺泡结构紊乱，肺间质胶原含量增多，肺组织开始出现纤维化。BLM28d组，可见肺泡结构破坏更为严重，肺泡间隔明显增宽，病变区胶原纤维成斑片状分布，纤维化程度严重。PTX干预组：肺泡结构仅见轻度紊乱，肺间质胶原沉积量较BLM28d组明显好转（图7)。提示PTX可有效改善肺组织纤维化。Od 76 28d PTX sham

工:‘MS身養編_翁__■國顯图7.肺组织的HE染色和Masson三色染色（bar=150叩i)。肺组织经BLM处理后，肺纤维化程度随时间延长而逐渐加重，CO丨丨ageni和轻脯氨酸含量随纤维化程度的加重而逐渐增加。28d时肺纤维化显著，collagen I含量较Od组高约8倍，经脯氨酸含量较Od组高约7倍，但经PTX干预后，collagenI及轻脯氨酸含量较BLM 28d组分别下降了约35%和40%(图8)。本实验中BLM成功诱发大鼠肺组织纤维化，并且PTX可明显改善BLM诱导的肺纤维化。


本文编号：2988135