戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

发布时间：2021-01-20 14:31

　　戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV）是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3（pIRF3）和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础. 

【文章来源】：昆明理工大学学报(自然科学版). 2019,44(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

)．IFN－βmRNA在表明HEV抑制IFN－β的产生．素［11］．利中病毒拷染时间增长而增加(见

(I∶C)处理6h后转染ORF3组，72h细胞活性无显著下降(见图1)．2.2HEV感染后抑制IFN－β的表达IFN－I的表达是宿主抗病毒感染的重要防御因素［11］．利用RT－qPCR检测HEV感染不同时间点细胞上清中病毒拷贝数及IFN－β的表达．结果显示，HEV拷贝数随感染时间增长而增加(见图2(a))．IFN－βmRNA在HEV感染后被显著抑制(P＜0.001)(见图2(b))．表明HEV抑制IFN－β的产生．(a)HEV拷贝数(b)IFN－βmRNA表达水平图2RT－qPCR检测HEV拷贝数和IFN－βmRNA表达水平的变化Fig.2HEVRNAcopynumber(a)andIFN－βmRNAexpression(b)detectedbyRT－qPCR2.3HEV感染抑制IRF3磷酸化转录因子IRF3激活后会诱导IFN－I表达，对抗病毒感染具有重要作用［12］．为了进一步探究IFN－β在HEV感染后期表达显著降低的原因，我们通过Westernblot法检测pIRF3蛋白在48h和72h的表达水27昆明理工大学学报(自然科学版)第44卷??????????????????????????????????????????????

平．用Poly(I∶C)刺激A549细胞6h后，接种HEV或过表达HEVORF3，同时设置空白对照组(MOCK)和单纯Poly(I∶C)处理组．实验结果显示，Poly(I∶C)能够显著刺激pIRF3的表达;HEV感染组在48h和72h均显著抑制pIRF3的表达;进一步证明过表达HEVORF3后，也能达到显著抑制pIRF3蛋白表达的效果，说明HEV抑制pIRF3是通过ORF3发挥作用(见图3)．图3Westernblot检测HEV感染后pIRF3蛋白水平的变化Fig.3TheexpressionofpIRF3inHEV－infectedA549cells48hand72hpost－infectionanalyzedbyWesternblot2.4HEV感染抑制IKKε的表达TLR3通路中IKKε和TBK1结合能够使IRF3磷酸化，从而诱导IFN－I的生成．为了探究HEV感染后期pIRF3蛋白表达降低的原因，我们验证了IKKε蛋白表达的变化．通过Westernblot检测IKKε蛋白在48h和72h的表达水平．用Poly(I∶C)刺激A549细胞6h后，接种HEV或过表达HEVORF3，同时设置空白对照组(Mock)和单纯Poly(I∶C)处理组．实验结果显示，与单纯Poly(I∶C)处理组相比HEV感染组在48h和72h均能显著抑制IKKε蛋白的表达;HEVORF3蛋白在72h也能显著抑制IKKε蛋白的表达(见图4)．说明在HEV感染后通过抑制IKKε的表达，进而抑制IRF3的磷酸化．2.5HEV感染后A549细胞内炎症因子的表达病毒感染机体后，宿主免疫系统会产生大量具有抗病毒作用的炎症因子，如IL6和IL8．为了进一步验证HEV感染后细胞内炎症因子表达水平的变化，我们用RT－qPCR检测HEV感染A549


本文编号：2989217