伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的体外作用研究

发布时间：2017-04-13 12:01

  本文关键词：伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的体外作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的： 1、以小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞为模型,探讨伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A (recombinant Borrelia burgdorferi membrane protein A, rBmpA)致莱姆关节炎的作用机制。 2、探讨异佛司可林(Isoforskolin, ISOF)对rBmpA致莱姆关节炎的抑制作用。 研究方法： 1、96孔细胞培养板培养RAW264.7细胞[培养基为10%FBS-DMEM(高糖)培养基,细胞浓度8×104～1×105/ml,体积100μl],培养6-12h待其完全贴壁后弃去培养基,用10μg/ml及20μg/ml rBmpA分别处理RAW264.7细胞,在作用3h、6h、12h、24h、36h及48h后收集细胞培养上清液,用ELISA法检测炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12及TNF-α的分泌量。 2、96孔细胞培养板培养RAW264.7细胞[培养基为10%FBS-DMEMi(高糖)培养基,细胞浓度8×104～1×105/ml,体积100ul],培养6-12h待其完全贴壁后弃去培养基,用20μg/ml rBmpA与100μM ISOF(总体积为100μl)共同处理RAW264.7细胞,在作用24h及48h后收集细胞培养上清液,用ELISA法检测炎性细胞因子IL-6及TNF-α的分泌量。 研究结果： 1、与正常对照组相比,随着rBmpA浓度的增加,RAW264.7细胞IL-6及TNF-α的分泌呈浓度依赖性上调；与3h组相比,随着rBmpA作用时间的延长,RAW264.7细胞IL-6的表达水平呈时间依赖性上调；与12h组相比,随着rBmpA作用时间的延长,RAW264.7细胞TNF-α的表达水平呈时间依赖性上调；rBmpA对其他炎性细胞因子(包括IL-1β、IL-8和IL-12)的刺激作用不明显。 2、与rBmpA处理组相比,rBmpA+ISOF组RAW264.7细胞培养上清液中炎性细胞因子IL-6及TNF-α水平显著降低。 结论： 1、rBmpA呈浓度及时间依赖性上调小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞炎性细胞因子IL-6及TNF-a的分泌,可能与莱姆关节炎的发生有关。 2、ISOF能够抑制rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞分泌释放炎性细胞因子IL-6及TNF-a,可能对莱姆关节炎有抗炎治疗作用。
【关键词】：莱姆关节炎 伯氏疏螺旋体 rBmpA 巨噬细胞 RAW264.7 异佛司可林
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R377
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 相关缩略词11-12
• 前言12-18
• 1 研究背景12-16
• 1.1 莱姆关节炎致病机制13-14
• 1.2 BmpA与莱姆关节炎关系14-15
• 1.3 异佛司可林与莱姆关节炎关系15-16
• 2 本课题意义16-17
• 3 技术路线17-18
• 第一部分 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞体外培养方法18-27
• 1 材料18-21
• 1.1 主要仪器18-19
• 1.2 主要试剂19-20
• 1.3 主要溶液试剂配制20-21
• 2 实验方法21-23
• 2.1 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞体外培养21-23
• 2.2 探索96孔细胞培养板培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞的最适浓度23
• 3 实验结果23-25
• 3.1 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞体外培养24
• 3.2 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞形态观察24-25
• 3.3 96孔细胞培养板培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞最适浓度的探索结果25
• 4 讨论25-26
• 5 结论26-27
• 第二部分 rBmpA对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的体外作用研究27-40
• 1 材料27-31
• 1.1 主要仪器27-29
• 1.2 主要试剂29-30
• 1.3 主要溶液试剂配制30-31
• 2 实验方法31-32
• 2.1 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞培养31-32
• 2.2 rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子的作用研究32
• 2.3 统计学处理32
• 3 实验结果32-38
• 3.1 rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化后细胞形态观察结果32-33
• 3.2 rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子IL-6的检测结果33-36
• 3.3 rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子TNF-α的检测结果36-38
• 3.4 rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子IL-1β、IL-8、IL-12的检测结果38
• 4 讨论38-39
• 5 结论39-40
• 第三部分 ISOF对rBmpA致莱姆关节炎的抑制作用研究40-51
• 1 材料40-45
• 1.1 主要仪器40-42
• 1.2 主要试剂42-43
• 1.3 主要溶液试剂配制43-45
• 2 实验方法45-46
• 2.1 小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞培养45
• 2.2 ISOF对rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子的抑制作用研究45-46
• 2.3 统计学处理46
• 3 实验结果46-50
• 3.1 ISOF对rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子IL-6的抑制作用结果46-48
• 3.2 ISOF对rBmpA诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞活化分泌释放炎性细胞因子TNF-α的抑制作用结果48-50
• 4 讨论50
• 5 结论50-51
• 参考文献51-55
• 综述55-66
• 参考文献61-66
• 攻读学位期间发表文章情况66-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 肖新华;廖二元;董源媛;赵向;刘江华;曹仁贤;文格波;;小鼠单核细胞RAW264.7的细胞生物学特征[J];南华大学学报(医学版);2008年03期

2 宝福凯;柳爱华;;伯氏疏螺旋体与莱姆病研究进展[J];热带医学杂志;2007年11期

3 富宁;Toll样受体与病原相关分子模式[J];上海免疫学杂志;2001年04期

4 金岐端;谢显厚;木全章;;毛喉鞘蕊花的化学成分研究[J];天然产物研究与开发;1990年03期

5 王宗玉,吴大刚;我国毛喉鞘蕊花的发掘与研究进展[J];天然产物研究与开发;1995年02期

6 沈云亨,姚春所,董旭俊,金歧端,许云龙;毛喉鞘蕊花化学及生理活性研究进展[J];天然产物研究与开发;2005年03期

7 宝福凯;赖名耀;张云波;董坚;赵桂萍;陈明清;柳爱华;;伯氏疏螺旋体膜蛋白BmpA研究进展[J];生命科学研究;2012年05期

8 李静;梁张;宝福凯;柳爱华;;莱姆病流行病学研究进展[J];中国热带医学;2013年08期

9 孙红胜;胡乃文;;莱姆病的临床表现[J];山东医药;2012年43期

10 张伟;许云龙;金歧端;;HPLC法同时测定鞘蕊苏中三种劳丹烷型二萜类成分[J];云南中医学院学报;2010年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 孟列素;Toll样受体在大鼠关节炎模型中的作用及其机制研究[D];西安交通大学;2010年

  本文关键词：伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的体外作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：303530