CD38对巨噬细胞TLR2基因表达及功能的影响

发布时间：2017-04-15 01:10

  本文关键词：CD38对巨噬细胞TLR2基因表达及功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的：炎症是机体组织对损伤因子的一种防御性反应。炎症反应参与了肥胖、动脉粥样硬化等多种代谢性疾病和心血管疾病的病理进程，TLR家族基因在炎症的发生发展中起着重要的作用，巨噬细胞及中性粒炎性细胞的浸润，伴随着大量炎性因子的分泌，从而促使泡沫细胞生成等过程与之密切相关。CD38具有双功能酶活性，即ADPR (ADP-ribosyl)环化酶和水解酶活性。它可以将NAD+催生成cADPR，同时可以将cADPR降解成ADPR，其发挥酶活性区域为胞外结构域。我们的前期结果显示，CD38基因缺失可明显增强小鼠巨噬细胞中TLR4的表达，同时显著抑制TLR2的表达。本文旨在探讨小鼠巨噬细胞中CD38对TLR2表达以及巨噬细胞功能的影响及其可能的分子机制，从而为进一步阐明CD38在炎症反应中的作用及其机制提供实验依据。 方法：1.原代细胞的培养及鉴定：小鼠腹腔注射3ml4%硫胶质促使巨噬细胞聚集，5天后收获细胞并于孵箱体外培养2天，确认基因型；2.检测巨噬细胞TLR2的表达；3. TLR2启动子区核心序列的构建及确定：设计TLR2上游区5kb至1kb的启动子区引物，将不同长度的片段分别构建入pGL3载体中，转染进细胞，进行双荧光素酶活性测定;4.生物信息学分析：用公认的信息数据库MotifMap及UCGU进行TLR2上游转录因子的预测和分析；5.核心区验证：使用等长度片段扩增，进行核心区突变与删除，进行双荧光素酶活性测定。6.荧光定量RT-PCR技术分析CD38敲除后TLR2对炎症因子的影响。 结果：1.原代分离并培养小鼠腹腔巨噬细胞，镜下观察其形态、大小及聚散性与报道相符，确认为巨噬细胞。2. CD38基因敲除的小鼠巨噬细胞中TLR2表达下降。3.信息数据库MotifMap显示TLR2启动子的核心序列为GGGANNNTCC。4.生物信息学预测CD38调控TLR2的可能的转录因子为NF-κB。5.实验验证TLR2的上游转录因子确为NF-κB。6. TLR2基因抑制后，，下游炎症因子Arg1和IL-10表达显著升高； TNF-α和IL-1β表达受到抑制。 结论：CD38基因缺失可显著抑制TLR2介导的抗炎性反应，其机制可能与CD38基因缺失抑制NF-κB信号通路，从而阻遏TLR2基因的表达，进而影响下游炎症反应有关。
【关键词】：CD38 TLR2 炎症反应 转录因子 巨噬细胞
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 绪论11-16
• 1.1 巨噬细胞与炎症反应11-14
• 1.1.1 炎症反应的病理特征及临床意义11
• 1.1.2 巨噬细胞在炎症反应中的作用11-13
• 1.1.3 巨噬细胞参与炎症反应的机制13-14
• 1.2 CD38 在炎症反应中的作用14
• 1.3 本研究目的及意义14-16
• 第2章 CD38 基因敲除对小鼠巨噬细胞 TLR2 表达的影响16-24
• 2.1 引言16
• 2.2 材料和方法16-20
• 2.2.1 实验动物16
• 2.2.2 CD38 基因敲除小鼠的制备和鉴定16-17
• 2.2.3 巨噬细胞的原代培养及基因型鉴定17-19
• 2.2.4 CD38 基因敲除小鼠中 TLR2 表达水平的测定19-20
• 2.3 结果20-22
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鉴定20
• 2.3.2 巨噬细胞原代培养及基因型鉴定20-21
• 2.3.3 CD38 敲除小鼠巨噬细胞中 TLR2 mRNA 水平表达下降21-22
• 2.4 讨论22-24
• 第3章 巨噬细胞 TLR2 基因表达的可能调控机制24-39
• 3.1 引言24
• 3.2 材料和方法24-28
• 3.2.1 TLR2 转录调控生物信息学预测24
• 3.2.2 TLR2 启动子不同长度片段及质粒的构建24-27
• 3.2.3 TLR2 启动子双荧光素酶活性的测定27-28
• 3.3 实验结果28-37
• 3.3.1 TLR2 启动子双荧光素酶报告载体的构建28-31
• 3.3.2 TLR2 启动子区核心序列的确定31-34
• 3.3.3 TLR2 转录调控生物信息学预测结果34-36
• 3.3.4 TLR2 启动子区核心序列的验证36-37
• 3.4 讨论37-39
• 第4章 CD38 缺失对巨噬细胞 TLR2 介导的信号通路的影响及其调控机制39-45
• 4.1 引言39
• 4.2 材料和方法39-40
• 4.2.1 巨噬细胞原代培养及基因型鉴定39
• 4.2.2 TLR2 对炎症因子的影响39-40
• 4.3 实验结果40-42
• 4.4 讨论42-45
• 第5章 结论45-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-51
• 附录51-53
• 综述53-63
• 参考文献59-63

【引证文献】

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1 方莉娜;乌司他丁对免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠巨噬细胞分化的影响[D];桂林医学院;2015年

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本文编号：307254