WIP1在端粒功能障碍引起的干细胞衰老及骨髓衰竭中的作用

发布时间：2017-04-15 01:19

  本文关键词：WIP1在端粒功能障碍引起的干细胞衰老及骨髓衰竭中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：WIP1(Wild-type p53-induced phosphatase)是一癌基因,在众多癌症细胞中高表达,同时是p53负反馈调节环路的重要组成成分,参与调控细胞的稳态平衡。已有的研究发现,p53及其上下游基因在端粒依赖的衰老进程中起重要作用。然而,对于WIP1基因在端粒功能障碍而引起的衰老过程中的调节作用还不清楚。我们通过杂交,建立WIP1和Terc双基因敲除小鼠品系。进一步互交,建立WIP1基因缺失的G3Terc-/-(第三代端粒酶缺失)小鼠。在此基础上,利用外周骨髓分析、体内造血重建实验以及竞争性骨髓移植实验等手段,对WIP1和Terc双基因敲除小鼠的成年鼠及衰老小鼠的HSC的功能研究。 实验结果显示WIP1敲除能够延长端粒酶缺失G3小鼠的寿命。WIP1缺失没有改善G3小鼠骨髓中M细胞(CD11b+),B细胞(B220+),CD4+T,CD8+T的比例。在干细胞水平,WIP1缺失的G3小鼠中最纯的干细胞(SLAM)数目较G3小鼠明显增加,而长期造血干细胞(LT),短期造血干细胞(ST)的数目没有改变。在祖细胞水平,共同髓系祖细胞(CMP),粒细胞髓系祖细胞(GMP),巨核细胞红系祖细胞(MEP)以及共同淋系祖细胞(CLP)的数目没有变化。骨髓竞争性移植实验和干细胞竞争性移植实验结果显示,供体为G3W1P1-/-来源的小鼠骨髓长期造血干细胞造血重建能力低于G3小鼠。提示WIP1缺失没有改善G3小鼠的造血重建能力。在对脾脏的中M细胞(CD11b+),B细胞(B220+),CD4+T,CD8+T的分析结果显示,WIP1缺失没有改善G3小鼠的脾脏中髓系浸润现象。其他组织器官的称重结果显示,与G3小鼠相比,G3WIP-/-小鼠脾脏,大脑,肝脏的重量没有变化,肾脏,心脏,雄性小鼠的睾丸重量有明显的增加。结果提示,WIP1缺失延长端粒功能障碍小鼠的寿命,但是没有改善造血系统的衰老。
【关键词】：WIP1 端粒酶缺失小鼠 骨髓造血干细胞 竞争性骨髓移植
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 致谢5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 1. 引言8-12
• 2. 材料与方法12-24
• 2.1. 实验动物、试剂及相关仪器12-15
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 试剂12-14
• 2.1.3 主要实验仪器14-15
• 2.2 实验方法15-24
• 2.2.1 G3WIP1双基因敲除小鼠的建立及PCR方法鉴定小鼠基因型15-17
• 2.2.2 骨髓细胞,脾脏细胞的分离17-19
• 2.2.3 流式细胞仪分析骨髓淋系及髓系细胞19
• 2.2.4 流式细胞仪分析骨髓长期造血干/祖细胞比例19-20
• 2.2.5 磁珠法富集.造血干细胞及进一步染色分析/分选20-21
• 2.2.6 骨髓造血干细胞自我更新及重建造血实验21-23
• 2.2.7 流式细胞仪分析外周血中各系细胞数量和比例23-24
• 2.2.8 统计学分析24
• 3. 实验结果24-37
• 3.1 PCR鉴定G3WIP1小鼠基因型24-25
• 3.2 WIP1敲除能够延长端粒酶缺失小鼠的寿命25-27
• 3.3 WIP1敲除没有改善G3骨髓中的BMT比例27-28
• 3.4 WIP1缺失的G3小鼠中骨髓干/祖细胞的数目分析28-31
• 3.5 竞争性移植实验检测WIP1敲除后G3 HSC(造血干细胞)自我更新和造血重建能力31-32
• 3.6 长期造血干细胞移植实验检测WIP1敲除G3小鼠HSC自我更新和造血重建能力32-34
• 3.7 WIP1敲除没有改善脾脏中髓系细胞入侵34-35
• 3.8 组织器官称重35-37
• 4. 讨论37-39
• 5. 结论39-41
• 6. 参考文献41-43
• 附录43

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李夏新;端粒、端粒酶与造血细胞[J];广东医学;1998年12期

2 张如刚,袁金辉,谢弘;端粒酶与肿瘤[J];细胞生物学杂志;2000年01期

3 黄礼年,王安潮;端粒、端粒酶与肿瘤关系研究进展[J];蚌埠医学院学报;2001年01期

4 张可莹,李庆章;端粒、端粒相关蛋白及其与细胞衰老关系的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2004年05期

5 万德芬;端粒[J];世界科学;1996年09期

6 刘春明;端粒与端粒酶的研究进展[J];松辽学刊(自然科学版);2001年02期

7 王国超,方正,王红庚,牛君仿;端粒酶与端粒的研究进展[J];河北农业大学学报;2002年S1期

8 蒋培余;端粒、端粒酶与肿瘤[J];生物学教学;2002年07期

9 任亚红;端粒及端粒酶的研究[J];安徽教育学院学报;2004年06期

10 彭江红;端粒、端粒酶与细胞衰老[J];安徽师范大学学报(自然科学版);1998年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 宋桂芹;吴卫平;宋春杰;尹岭;朱克;;实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

2 曹华;郑捷;;UVA1照射硬皮病小鼠模型的实验研究[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

3 陆树良;金曙雯;金再敏;史济湘;丁长囡;;烫伤小鼠模型制作中脱毛剂对皮肤组织损害的病理学观察[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年

4 陈欣;龚秀丽;曾凡一;黄淑帧;;遗传病宫内治疗的研究-应用改良的干细胞宫内移植方法建立高嵌合率小鼠模型[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）[C];2008年

5 文峻;刘鲁伟;范云;屈学民;龙开平;王斯刚;;一种心肌细胞替换实验技术的研究[A];全国第九届心脏学会第十二届心功能学会《心脏杂志》编委会联合学术会议论文集[C];2005年

6 罗萍;卢雪红;吴曼;刘树军;尚秀兰;;来氟米特对狼疮肾炎小鼠的治疗作用及机制探讨[A];全国第八届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2010年

7 杜家忠;李松滨;李宝龙;高维滨;;针刺对乳腺增生症小鼠模型抑制作用的病理形态定量研究[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年

8 白丽;张宇红;潘静;王刚;丁健青;陈生弟;;红景天甙对帕金森病小鼠模型的治疗作用及其机制研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

9 鞠梅;张青松;张小华;陈昆;常宝珠;顾恒;;不同剂量的UVA1辐射硬皮病鼠模型的实验研究[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

10 李文娟;范小芳;陈兆琴;胡良冈;陈然;邓蔚;龚永生;;间断低氧模拟睡眠呼吸暂停综合征小鼠模型的建立[A];中国睡眠研究会第六届学术年会论文汇编[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 刘霞;美制造出感染丙肝病毒的小鼠模型[N];科技日报;2011年

2 孔琪　张连峰;小动物 大作为[N];健康报;2010年

3 记者 仇逸;红斑狼疮小鼠模型探病因[N];新华每日电讯;2003年

4 王迪;胰腺癌小鼠模型面世[N];医药经济报;2003年

5 张田勘;细胞调亡的意义[N];中国人口报;2002年

6 张田勘;2009年诺贝尔医学奖：揭示衰老和癌症的秘密[N];大众科技报;2009年

7 张孔生;刘院士为你解读“端粒”[N];扬州日报;2009年

8 记者 熊琳;端粒和端粒酶:解开人类衰老及癌症之谜[N];新华每日电讯;2009年

9 袁s

本文编号：307289