抗菌肽attacin在家蝇胚胎细胞的表达及生物学活性研究

发布时间：2017-04-15 04:17

  本文关键词：抗菌肽attacin在家蝇胚胎细胞的表达及生物学活性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：以家蝇抗菌肽attacin为目标基因，用自行建立的家蝇胚胎细胞系（MDEC-07114）及含有杆状病毒穿梭载体的Bacmid构建家蝇胚胎细胞真核表达系统，对表达产物抗菌肽attacin进行抗菌、热稳定性等生物学活性研究。 方法：1、全基因合成家蝇抗菌肽attacin，，将目的基因attacin克隆入PUC57质粒，重组质粒经双酶切后连接到pFastBacTMHTA供体质粒，制备重组杆状病毒BacmidDNA；2、重组杆状病毒Bacmid DNA转染家蝇胚胎细胞MDEC-07114，提取培养上清和细胞裂解物粗蛋白，SDS-PAGE检测目的蛋白，镍柱纯化粗蛋白；3、SDS-PAGE和Western-Blot检测、鉴定蛋白表达情况；4、表达产物生物学活性检测：对革兰氏阴性菌（大肠杆菌）和革兰氏阳性菌（金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）的抑制作用；经60-100℃水浴1-30min的热稳定性；经pH5.0-10.0的酸碱作用后的耐受性。结果：1、成功构建含家蝇抗菌肽attacin基因的杆状病毒表达载体（Bacmid-pFastBacTM-attacin）；2、重组杆状病毒Bacmid DNA成功转染家蝇胚胎细胞，细胞出现直径变大、停止生长、分离等现象；3、经SDS-PAGE检测培养上清和细胞裂解物粗蛋白均含有分子量为24KD的目的蛋白；4、镍柱纯化粗蛋白后经SDS-PAGE和Western-Blot检测证实含目的蛋白；5、生物学活性检测：表达产物抗菌肽attacin可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌活性；经60-100℃水浴1-30min及pH5.0-10.0酸碱作用后抗菌肽对大肠杆菌的抑菌活性影响不明显。 结论：家蝇胚胎细胞MDEC-07114可用于杆状病毒-真核表达系统表达抗菌肽attacin；表达产物抗菌肽attacin具有生物学活性。
【关键词】：抗菌肽 attacin 家蝇胚胎细胞 表达 生物学活性
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：Q78;R384.2
【目录】：

• 英汉缩略词对照表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-23
• 结果23-35
• 讨论35-39
• 结论39
• 参考文献39-42
• 综述：家蝇抗菌肽及其基因工程研究进展42-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 作者简介53-54

【参考文献】

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本文编号：307616