电压依赖性钾通道在小鼠胃肠平滑肌运动调控中作用及其机制研究
发布时间：2021-03-13 13:56
电压依赖性钾通道（Voltage-dependent potassium channels, KV）广泛分布于胃肠平滑肌细胞上，对平滑肌运动的调控起着重要的作用。根据KV的失活动力学特征可以将胃肠平滑肌上电压依赖性钾电流（KVcurrents, IKV）分为快速失活成分（fast inactivation component,IKVfast）和慢速失活成分（slow inactivation component, IKVslow）两部分。两种电流具有不同的动力学和药理学特性。他们在设定平滑肌静息膜电位（resting potential, RP）和动作电位（action potential,AP）的塑造等方面发挥重要作用。因此，当KV通道功能异常时可以导致平滑肌运动异常，但是目前有关平滑肌细胞KV通道异常与平滑肌动力障碍的研究报道甚少。肠梗阻是外科常见的急腹症之一，任何原因引起的肠内容物通过障碍均可以引起肠梗阻（obstruction）。我们的前期研究表明，在不全性机械性肠梗阻模型中不仅观察到平滑肌形态学重建，即平滑肌细胞肥大（hypertrophy）并伴有电生理特性和收缩功能的改变。...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
前言
第一章 小鼠不全性肠梗阻引起的肥大平滑肌细胞电压依赖性钾通道的重建
1.1 引言
1.2 实验仪器及材料
1.2.1 实验仪器
1.2.2 主要实验药品及试剂
1.2.3 主要溶液的配制方法
1.3 实验方法
1.3.1 慢性不全性肠梗阻小鼠模型的制备方法
1.3.2 小肠平滑肌组织的制备
1.3.3 细胞内微电极记录试验
1.3.4 新鲜分离小肠平滑肌细胞制备
1.3.5 全细胞膜片钳试验
1.3.6 蛋白免疫印迹试验
1.3.7 免疫沉淀试验
1.3.8 免疫荧光组织化学
1.3.9 统计学方法
1.4 实验结果
1.4.1 慢性不全性肠梗阻引起的小肠平滑肌形态学改变
1.4.2 梗阻小肠平滑肌慢波和静息膜电位改变
V电生理学改变"> 1.4.3 梗阻小肠平滑肌 KV电生理学改变
V电流密度的改变"> 1.4.3.1 梗阻小肠平滑肌细胞 IKV电流密度的改变
V通道电压敏感性的改变"> 1.4.3.2 梗阻小肠平滑肌细胞 KV通道电压敏感性的改变
V对阻断剂敏感性的改变"> 1.4.3.3 梗阻小肠平滑肌细胞 IKV对阻断剂敏感性的改变
V分子生物学特性改变"> 1.4.4 梗阻小肠平滑肌细胞 KV分子生物学特性改变
V表达改变"> 1.4.4.1 梗阻小肠平滑肌细胞 KV表达改变
V通道磷酸化改变"> 1.4.4.2 梗阻小肠平滑肌细胞 KV通道磷酸化改变
1.5 讨论
1.6 本章小结
第二章 外源性 H2S 兴奋小鼠胃窦平滑肌的离子通道机制研究
2.1 引言
2.2 实验仪器及材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 主要实验试剂及材料
2.2.3 主要溶液及配制
2.3 实验方法
2.3.1 胃窦平滑肌收缩实验
2.3.2 新鲜分离胃窦平滑肌细胞的制备
2.3.3 原代培养胃窦平滑肌细胞
2.3.4 人胚胎肾细胞（H293）细胞培养，冻存和复苏
2.3.4.1 细胞培养
2.3.4.2 细胞冻存
2.3.4.3 细胞复苏
2.3.5 转染质粒的制备
2.3.6 细胞转染
2.3.6.1 质粒转染
2.3.6.2 siRNA 转染
2.3.7 细胞膜电位检测
2.3.8 蛋白质 S-sulfhydration 检测
2.3.9 免疫印迹实验
2.4. 实验结果
2S 对小鼠胃窦平滑肌运动的兴奋性作用"> 2.4.1 4-AP 和 DTT 阻断 H2S 对小鼠胃窦平滑肌运动的兴奋性作用
2S 对 IKV的作用"> 2.4.2 H2S 对 IKV的作用
2S 对 IKVfast的抑制作用"> 2.4.3 NEM 和 DTT 阻断 H2S 对 IKVfast的抑制作用
2S 对异源表达的 KV4 家族各成员电流的影响"> 2.4.4 H2S 对异源表达的 KV4 家族各成员电流的影响
2S 抑制 KV4.3 电流作用的影响"> 2.4.5 NEM 和 MTSET 对 H2S 抑制 KV4.3 电流作用的影响
2S 对培养的小鼠胃窦平滑肌细胞膜电位的影响"> 2.4.6 H2S 对培养的小鼠胃窦平滑肌细胞膜电位的影响
V4.3 对 H2S 引起的胃窦平滑肌膜电位去极化的影响"> 2.4.7 敲减 KV4.3 对 H2S 引起的胃窦平滑肌膜电位去极化的影响
2S 对 KV4.3 通道的硫氢化作用"> 2.4.8 H2S 对 KV4.3 通道的硫氢化作用
2.5. 讨论
2.6. 本章小结
全文小结
参考文献
综述 胃肠平滑肌电压门控离子通道的研究进展
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或录用的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠不全性肠梗阻对Cajal间质细胞表型的影响[J]. 郭新,刘东海,黄旭,陆红丽,吴贻松,韩燕飞,许文燮. 世界华人消化杂志. 2011(18)
本文编号：3080339
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
前言
第一章 小鼠不全性肠梗阻引起的肥大平滑肌细胞电压依赖性钾通道的重建
1.1 引言
1.2 实验仪器及材料
1.2.1 实验仪器
1.2.2 主要实验药品及试剂
1.2.3 主要溶液的配制方法
1.3 实验方法
1.3.1 慢性不全性肠梗阻小鼠模型的制备方法
1.3.2 小肠平滑肌组织的制备
1.3.3 细胞内微电极记录试验
1.3.4 新鲜分离小肠平滑肌细胞制备
1.3.5 全细胞膜片钳试验
1.3.6 蛋白免疫印迹试验
1.3.7 免疫沉淀试验
1.3.8 免疫荧光组织化学
1.3.9 统计学方法
1.4 实验结果
1.4.1 慢性不全性肠梗阻引起的小肠平滑肌形态学改变
1.4.2 梗阻小肠平滑肌慢波和静息膜电位改变
V电生理学改变"> 1.4.3 梗阻小肠平滑肌 KV电生理学改变
V电流密度的改变"> 1.4.3.1 梗阻小肠平滑肌细胞 IKV电流密度的改变
V通道电压敏感性的改变"> 1.4.3.2 梗阻小肠平滑肌细胞 KV通道电压敏感性的改变
V对阻断剂敏感性的改变"> 1.4.3.3 梗阻小肠平滑肌细胞 IKV对阻断剂敏感性的改变
V分子生物学特性改变"> 1.4.4 梗阻小肠平滑肌细胞 KV分子生物学特性改变
V表达改变"> 1.4.4.1 梗阻小肠平滑肌细胞 KV表达改变
V通道磷酸化改变"> 1.4.4.2 梗阻小肠平滑肌细胞 KV通道磷酸化改变
1.5 讨论
1.6 本章小结
第二章 外源性 H2S 兴奋小鼠胃窦平滑肌的离子通道机制研究
2.1 引言
2.2 实验仪器及材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 主要实验试剂及材料
2.2.3 主要溶液及配制
2.3 实验方法
2.3.1 胃窦平滑肌收缩实验
2.3.2 新鲜分离胃窦平滑肌细胞的制备
2.3.3 原代培养胃窦平滑肌细胞
2.3.4 人胚胎肾细胞（H293）细胞培养，冻存和复苏
2.3.4.1 细胞培养
2.3.4.2 细胞冻存
2.3.4.3 细胞复苏
2.3.5 转染质粒的制备
2.3.6 细胞转染
2.3.6.1 质粒转染
2.3.6.2 siRNA 转染
2.3.7 细胞膜电位检测
2.3.8 蛋白质 S-sulfhydration 检测
2.3.9 免疫印迹实验
2.4. 实验结果
2S 对小鼠胃窦平滑肌运动的兴奋性作用"> 2.4.1 4-AP 和 DTT 阻断 H2S 对小鼠胃窦平滑肌运动的兴奋性作用
2S 对 IKV的作用"> 2.4.2 H2S 对 IKV的作用
2S 对 IKVfast的抑制作用"> 2.4.3 NEM 和 DTT 阻断 H2S 对 IKVfast的抑制作用
2S 对异源表达的 KV4 家族各成员电流的影响"> 2.4.4 H2S 对异源表达的 KV4 家族各成员电流的影响
2S 抑制 KV4.3 电流作用的影响"> 2.4.5 NEM 和 MTSET 对 H2S 抑制 KV4.3 电流作用的影响
2S 对培养的小鼠胃窦平滑肌细胞膜电位的影响"> 2.4.6 H2S 对培养的小鼠胃窦平滑肌细胞膜电位的影响
V4.3 对 H2S 引起的胃窦平滑肌膜电位去极化的影响"> 2.4.7 敲减 KV4.3 对 H2S 引起的胃窦平滑肌膜电位去极化的影响
2S 对 KV4.3 通道的硫氢化作用"> 2.4.8 H2S 对 KV4.3 通道的硫氢化作用
2.5. 讨论
2.6. 本章小结
全文小结
参考文献
综述 胃肠平滑肌电压门控离子通道的研究进展
参考文献
致谢
攻读博士学位期间已发表或录用的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠不全性肠梗阻对Cajal间质细胞表型的影响[J]. 郭新,刘东海,黄旭,陆红丽,吴贻松,韩燕飞,许文燮. 世界华人消化杂志. 2011(18)
本文编号：3080339
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/3080339.html
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