链霉菌NOV-0827次级代谢产物的研究

发布时间：2017-04-15 12:03

  本文关键词：链霉菌NOV-0827次级代谢产物的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本实验目的是对链霉菌（Streptomyces）NOV-0827菌株的发酵产物进行分离纯化，希望从中获得结构新颖或生物活性多样的化合物。 Hsp90作为抗癌药物的分子靶点备受关注。特别是毒性较小的Hsp90C-端抑制剂是目前药物筛选的重点。本实验在一株链霉菌NOV-0827产生的次级代谢产物中发现了一类具有抗肿瘤活性的化合物，TLC结果提示活性组分含有香豆素类化合物，结合HPLC、HPLC-MSn信息，初步鉴定含有novobiocin（新生霉素）。对菌株NOV-0827的发酵工艺条件进行了优化，初步设计出了该菌株的最佳发酵条件，并对其进行大量发酵。采用大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析、反相C18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱层析、半制备HPLC等分离手段对菌株NOV-0827的次级代谢产物进行分离纯化，共分离到3个化合物，NOV-0827-A、NOV-0827-B和NOV-0827-C。对获得的化合物进行紫外、红外、质谱、核磁等方法分析，分别与文献中报道的香豆素类抗生素新生霉素（novobiocin），大环内酰胺类抗生素GT-32A和GT-32B同质。经过MTT法来检测化合物的抗肿瘤活性，结果显示化合物NOV-0827-B和NOV-0827-C均对人结肠癌细胞SW620具有较强的增殖抑制活性，其IC50值分别为1.107μmol/mL和5.358μmol/mL。 本研究是首次从同一株陆生链霉菌NOV-0827产生的次级代谢产物中同时分离到新生霉素（novobiocin）及其他两个具有抗肿瘤活性的大环内酰胺类化合物，这两个大环内酰胺类化合物具有较强的抗肿瘤活性，有可能成为一类新的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的天然化学治疗药物，具有较强的开发前景。且近期国内外研究表明，新生霉素是Hsp90的C-端抑制剂，具有抗癌作用和调节作用，并能与抗癌药联合应用，故在抗肿瘤治疗方面也具有良好的应用前景。
【关键词】：链霉菌 新生霉素 发酵优化 分离纯化 结构鉴定 抗肿瘤活性
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 缩略词语8-9
• 前言9-13
• 第一部分 链霉菌 NOV-0827 的菌种选育13-19
• 1 实验材料13-15
• 1.1 主要实验设备与仪器13-14
• 1.2 主要试剂与原材料14
• 1.3 实验菌株14
• 1.4 培养基及培养条件14-15
• 2 实验方法15-16
• 2.1 菌种的活化及自然选育15
• 2.2 菌株筛选15
• 2.3 筛选菌株稳定性试验15
• 2.4 菌丝体生长形态观察15-16
• 2.5 菌种保藏16
• 3 结果与讨论16-18
• 3.1 自然选育结果16
• 3.2 菌株筛选结果16-17
• 3.3 筛选菌株稳定性实验结果17
• 3.4 菌丝体生长形态观察17-18
• 4 小结18-19
• 第二部分 链霉菌 NOV-0827 发酵条件的优化19-31
• 1 实验材料19-20
• 1.1 主要实验设备与仪器19
• 1.2 主要试剂与原材料19-20
• 1.3 实验菌株20
• 1.4 培养基及培养条件20
• 2 实验方法20-23
• 2.1 单因素实验设计20-21
• 2.2 正交实验设计21-22
• 2.3 发酵过程的影响因素及其控制22-23
• 3 结果与讨论23-30
• 3.1 单因素实验设计结果23-24
• 3.2 正交实验设计结果24-27
• 3.3 摇瓶的最优发酵条件27-30
• 4 小结30-31
• 第三部分 链霉菌 NOV-0827 次级代谢产物的提取及分离纯化31-39
• 1 实验材料31-32
• 1.1 主要实验设备与仪器31
• 1.2 主要试剂与耗材31-32
• 2 实验方法32-35
• 2.1 活性组分的薄层色谱分析32
• 2.2 HPLC 分析及制备条件32
• 2.3 中压反相制备色谱条件32-33
• 2.4 发酵产物的提取和纯化33-35
• 3 结果与讨论35-38
• 3.1 发酵液 HPLC 分析35-36
• 3.2 中低压制备色谱检测36
• 3.3 HPLC 制备后单体的分析检测36-37
• 3.4 TLC 分析37-38
• 4 小结38-39
• 第四部分 化合物的结构鉴定39-47
• 1 实验仪器及材料39
• 2 实验方法39-40
• 2.1 紫外光谱分析39
• 2.2 红外光谱分析39-40
• 2.3 质谱分析40
• 2.4 NMR 分析40
• 3 结果与讨论40-46
• 3.1 化合物 NOV-0827-A 的结构鉴定40-42
• 3.2 化合物 NOV-0827-B 的结构鉴定42-44
• 3.3 化合物 NOV-0827-C 的结构鉴定44-46
• 4 小结46-47
• 第五部分 化合物抗肿瘤活性的鉴定47-50
• 1 实验仪器及材料47
• 2 实验原理及方法47-48
• 2.1 四氮唑盐（microculture tetrozolium,MTT）还原法原理47
• 2.2 实验方法47-48
• 3 结果与讨论48-49
• 4 小结49-50
• 结语50-52
• 致谢52-53
• 参考文献53-56
• 附图56-63
• 综述63-95
• 参考文献91-95

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 吴丽贤;许建华;;以热休克蛋白90为靶点的抗肿瘤药研究进展[J];海峡药学;2005年06期

2 孟帅;山广志;李卓荣;;Hsp90抑制剂的研究进展[J];中国抗生素杂志;2011年04期

3 陆云飞;新生霉素的抗癌作用以及对鬼臼乙叉甙的调节作用[J];肿瘤防治研究;1995年06期

4 姚静;山广志;李卓荣;;热休克蛋白90抑制剂的研究进展[J];中国新药杂志;2006年20期

5 吴丽贤;许建华;张昆仲;温彩霞;黄秀旺;;新生霉素抑制K562细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系[J];肿瘤防治研究;2007年11期

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本文编号：308334