定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃肠功能的实验研究

发布时间：2017-04-17 04:04

本文关键词：定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃肠功能的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】用声-光-电复合应激刺激法建立卵巢早衰大鼠模型，给予定经汤进行治疗，通过观察大鼠胃肌条的收缩、胃电慢波、胃排空率、小肠推进率、胃酸、胃蛋白酶活性、ICC等，探讨定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃肠功能的影响和调整机制。【方法】 1.卵巢早衰大鼠模型的制备。购买一批SPF级SD雌性大鼠，体重180-220g，适应性饲养5d后，每天定时用显微镜观察阴道涂片，选择有2个连续正常动情周期的大鼠用于造模实验，其余淘汰。筛选后的大鼠随机分为正常组和卵巢早衰模型组，每组20只，共40只。主要刺激方法：采用声-光-电复合应激刺激大鼠（声、光同时刺激10s，再加电击足底，声-光-电3种刺激同时维持60s后声-光刺激停止，电击足底维持5s，总计时间75s。每日进行3次，1h内完成）。附加应激方法：禁食24h，禁水24h，电击足底，4℃冷水游泳5min，通宵照明，夹尾1min，45℃烘箱热烘5min，每天随机给予一种刺激。连续造模20d，通过观察大鼠的体征，动情周期，组织形态学，促卵泡成熟激素（FSH）和雌二醇（E2）水平的变化，判断造模是否成功。 2.定经汤对大鼠胃窦环行平滑肌收缩的影响。将20只雌性大鼠随机分为正常组（10只）和模型组（10只），正常组正常饲养，模型组按照第一部分的方法造模。造模20d后，制备大鼠胃窦环形肌，用MP150生物信号采集系统同时记录安置在各恒温灌流肌机槽中的胃平滑肌条的收缩活动，观察正常组和模型组胃肌条收缩幅度，频率的差异。将56只雌性大鼠进行造模，连续造模20d后，将大鼠随机分为全方组、主药对组、无主药对组、疏肝组和补肾组、无钙组和阿托品组7组，每组8只。给予各组大鼠高、中、低3个浓度相应的药物，观察定经汤及其拆方对卵巢早衰模型大鼠胃窦平滑肌收缩的影响，确定最佳浓度和最佳配方，后续实验均用此配方。 3.定经汤对大鼠胃电慢波的影响。将30只雌性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组，每组10只。从造模的第一天开始，正常组和模型组灌胃生理盐水，给药组用定经汤灌胃。连续20d后，用美国BIOPAC公司MP150多导生理记录仪以及AcqKnowledge软件记录各组大鼠胃电慢波的胃电慢波频率、峰峰值等指标。 4.定经汤对大鼠胃排空和小肠推进率的影响。将30只雌性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组，每组10只。从造模的第一天开始，正常组和模型组灌胃生理盐水，给药组用定经汤灌胃。连续造模20d，大鼠禁食（不禁水、药）24h，正常组和模型组灌胃生理盐水，给药组灌胃定经汤，30min后灌服2%葡聚糖蓝2000溶液，每只0.4ml。再经20min后颈推脱臼处死动物，开腹取全部胃肠，测定胃排空和小肠推进率。 5.定经汤对大鼠胃酸和胃蛋白酶活性的影响。将30只雌性大鼠随机分为正常组、模型组、给药组，每组10只。从造模的第一天开始，正常组和模型组灌胃生理盐水，治疗组用定经汤灌胃。实验20d后，将大鼠禁食不禁水24h，治疗组用定经汤灌胃，正常组和模型组用生理盐水灌胃，1h后，用乌拉坦麻醉大鼠于腹部做切口，结扎幽门与十二指肠连接处，正常组和模型组由结扎部位向胃注入生理盐水，治疗组注入定经汤，进行胃酸和胃蛋白酶活性实验。 6. ICC超微结构的观察。打开大鼠胃腔，取大鼠胃组织一块。将大鼠胃标本放在装有凉Krebs液的容器内，仔细去除胃内容物，然后将组织平铺于滤纸上，立即放入3%戊二醛固定，2%PBS冲洗，再用1%锇酸固定2h，2%PBS冲洗，乙醇、丙酮梯度脱水，通过浸透，树脂聚合，精确定位,，70nm超薄切片，1%醋酸铀、枸橼酸铅染色，置透射电镜下观察正常组、卵巢早衰模型组、给药组大鼠胃ICC超微结构。【结果】 1.造模后，与正常组进行外在体征对比，模型组大鼠表现为体重增加缓慢，活动减少，，反应迟钝，体毛黯淡无光泽。大便性状发生改变，饮食量减少等症状；模型组与正常组相比，模型组促卵泡成熟激素（FSH）水平明显升高，而雌二醇（E2）水平则明显下降，差异具有统计学意义（P㩳0.01）；卵巢形态学上，正常组大鼠卵巢外观颜色红润，卵泡腔内卵子生长良好颗粒细胞丰富，有排卵后的出血点。而模型大鼠卵巢外观颜色淡红，卵泡内为一空泡，无卵子生成，颗粒细胞少，无排卵后的出血点或出血点少。 2.与正常组相比，模型组的胃窦平滑肌收缩频率低，幅度较小，差异具有统计学意义（P㩳0.01）；定经汤及其拆方对卵巢早衰模型大鼠胃窦平滑肌收缩有明显的增强作用，其中高浓度的无主药组作用最明显。与给药前对比，全方组和无主药组胃窦肌条收缩力在高、中、低3个浓度水平都有明显增强（P㩳0.01或P㩳0.05）；主药组、补肾组和疏肝组在高浓度或中浓度水平有明显增强（P㩳0.05）；与全方组对比，无钙组和阿托品组给药后收缩率明显下降（P㩳0.01或P㩳0.05）。 3.模型组大鼠的胃电慢波峰峰值和频率最小，图形紊乱。模型组与正常组、给药组均存在显著性差异（P㩳0.01），说明定经汤能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃电慢波节律紊乱，促进胃平滑肌收缩； 4.模型组胃排空和小肠推进率显著低于正常组和给药组（P㩳0.01），定经汤能促进卵巢早衰模型大鼠的胃排空和小肠推进率。 5.模型组胃酸含量和胃蛋白酶活力显著低于正常组和治疗组（P㩳0.01），定经汤有促进胃酸分泌，促进胃蛋白酶活性的作用。 6.通过透射电镜观察，与正常组相比，模型组大鼠胃的ICC总体数目不多，超微结构较模糊，细胞器明显减少，胞质溶解，内质网明显扩张、线粒体明显减少、肿胀等，说明卵巢早衰模型大鼠的胃ICC受损。观察给药组后，发现定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃ICC有修复作用。【结论】 1.复合心理刺激建立的卵巢早衰动物模型和临床卵巢早衰患者的症状基本相似，说明此方法可行，同时也表明本实验造模成功。 2.定经汤能促进胃窦平滑肌条的收缩作用，其机制可能经由胆碱能的M受体介导，并通过Ca2+通道发挥作用。 3.定经汤能抑制卵巢早衰模型大鼠的胃电慢波节律紊乱，增加胃电慢波的频率和峰峰值。 4.定经汤能促进大鼠的胃排空率和小肠推进率，增强胃肠动力。 5.定经汤具有促进胃酸分泌，增加胃液分泌量，促进胃蛋白酶活性的作用。 6.复合心理刺激建立的卵巢早衰大鼠模型，胃ICC会受到损伤，而定经汤对卵巢早衰模型大鼠受损的胃ICC有修复作用。
【关键词】：定经汤 卵巢早衰 胃窦平滑肌 胃电慢波 胃酸 ICC
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R285.5
【目录】：

摘要9-13
目的9
方法9-10
结果10-11
结论11-13
Abstract13-17
前言17-22
1. 卵巢早衰简介17-18
2. 卵巢早衰的治疗18-19
2.1. 雌孕激素替代治疗18
2.2. 促排卵治疗18
2.3. 免疫治疗18
2.4. 赠卵胚胎移植术18-19
2.5. 中医治疗19
3. 卵巢早衰的动物模型19-20
3.1. 手术型 POF 模型19
3.2. 自身免疫 POF 模型19
3.3. 药物所致 POF 模型19
3.4. 心理应激 POF 模型19-20
3.5. 其它 POF 模型20
4. 课题研究依据20-21
4.1. 卵巢早衰和胃肠疾病的关系20-21
4.2. 定经汤的临床作用21
5. 课题研究意义21-22
第一部分卵巢早衰动物模型的制作及评价22-29
1. 材料22-23
1.1. 动物与饲料22
1.2. 药物与试剂22
1.3. 实验仪器22-23
2. 方法23-26
2.1. 卵巢早衰大鼠模型建立23-24
2.1.1. 动物分组23
2.1.2. 动物模型复制方法23-24
2.1.3. 动物处死24
2.2. 动物实验指标观察24-26
2.2.1. 大鼠外在体征观察24
2.2.2. 大鼠动情期变化观察24
2.2.3. 促卵泡成熟激素（FSH）和雌二醇（E2）的含量测定24-25
2.2.4. 卵巢块石蜡包埋和切片制作25
2.2.5. 卵巢的形态学观察25-26
2.3. 统计分析26
3. 结果26-27
3.1. 大鼠外在体征变化26
3.2. 大鼠动情周期变化26
3.3. 大鼠血清 E2、FSH 水平的变化26-27
3.4. 大鼠卵巢组织形态学的变化27
4. 讨论27-29
第二部分定经汤及其拆方对卵巢早衰大鼠胃窦平滑肌收缩的影响29-37
1. 材料29-30
1.1. 动物与饲料29
1.2. 药物与试剂29-30
1.2.1. 中药材29
1.2.2. 试剂29-30
1.3. 实验仪器30
2. 方法30-33
2.1. 定经汤及其拆方组设计实验方案30-32
2.1.1. 定经汤中药材的炮制30-31
2.1.2. 定经汤及其拆方分组设计31-32
2.2. 动物分组和模型复制32
2.3. 胃窦肌条制备32
2.4. 给药方法32
2.5. 数据处理32
2.6. 统计学方法32-33
3. 结果33-35
3.1. 正常组和模型组的胃窦平滑肌收缩结果33
3.2. 定经汤及其拆方高浓度水平对胃窦平滑肌收缩的结果33
3.3. 定经汤及其拆方中浓度水平对胃窦平滑肌收缩的结果33-34
3.4. 定经汤及其拆方低浓度水平对胃窦平滑肌收缩的结果34
3.5. 钙离子和阿托品对胃窦平滑肌收缩的影响34-35
4. 讨论35-37
第三部分定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃电慢波的影响37-41
1. 材料37
1.1. 动物与饲料37
1.2. 药物与试剂37
1.3. 实验仪器37
2. 方法37-38
2.1. 动物模型复制37-38
2.2. 胃电慢波的记录38
2.3. 统计学方法38
3. 结果38-39
3.1. 胃电慢波38-39
4. 讨论39-41
第四部分定经汤对卵巢早衰大鼠胃排空率和小肠推进率的影响41-44
1. 材料41
1.1. 动物与饲料41
1.2. 药物与试剂41
1.3. 实验仪器41
2. 方法41-42
2.1. 动物模型复制41-42
2.2. 胃排空和小肠推进率42
2.3. 统计分析42
3. 结果42-43
4. 讨论43-44
第五部分定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃酸和胃蛋白酶活性的影响44-47
1. 材料44
1.1. 动物与饲料44
1.2. 药物与试剂44
2. 方法44-46
2.1. 动物模型复制44-45
2.2. 给药和手术方法45
2.3. 大鼠胃蛋白酶活性的检测45
2.4. 大鼠胃酸分泌量的测定45
2.5. 统计分析45-46
3. 结果46
4. 讨论46-47
第六部分大鼠胃 ICC 超微结构的观察47-51
1. 材料47
1.1. 动物与饲料47
1.2. 试剂47
1.3. 实验仪器47
2. 电镜观察47-48
3. 结果48-49
3.1. 正常大鼠胃 ICC 超微结构观察48
3.2. 卵巢功能性早衰大鼠胃 ICC 超微结构观察48-49
3.3. 定经汤对卵巢功能性早衰大鼠胃 ICC 超微结构的影响49
4. 讨论49-51
结论51-52
参考文献52-56
攻读学位期间发表的论文56-57
英文缩略表57-58
致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库前6条

1 陈捷;沈宇飞;;激素补充治疗卵巢早衰的疗效观察[J];白求恩军医学院学报;2012年02期

2 王清秀;;卵巢早衰与储备功能下降的相关因素探讨[J];当代医学;2012年11期

3 王景杰,黄裕新,郭庆东,秦明,高巍,王庆莉;心理性应激状态下针刺对大鼠DMV放电、胃电和胃粘膜损伤的影响[J];第四军医大学学报;2001年09期

4 郝悦,黄裕新,王景杰;心理性应激对大鼠胃排空的影响及胃粘膜的损伤[J];第四军医大学学报;2002年07期

5 徐苓,宋亦军;卵巢早衰的临床表现和诊断标准[J];实用妇产科杂志;2003年04期

6 高建国,李俊,王进峰;“肾为胃关”探源流——论肾胃关系及其临床意义[J];上海中医药杂志;2001年06期

本文关键词：定经汤对卵巢早衰模型大鼠胃肠功能的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：312347

资料下载

论文发表

支付宝下载

Download by Alipay
微信下载

Download by Wechat
会员下载

Download by Member

本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/312347.html

上一篇：呼吸道合胞病毒的逆转录环介导等温扩增检测及流行病学分析
下一篇：探索FtsZ突变体影响E.coli中MreB细胞定位模式的分子机制

论文发表

·知网|万方|维普|龙源|省级|国家级|科技核心|北大核心|南大核心CSSCI|EI|SCI|SSCI|