大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养

发布时间：2021-04-15 16:19

　　目的探讨大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养技术。方法采用差速贴壁法清除成纤维细胞及酶消化去除少突胶质细胞污染,应用免疫荧光进行细胞鉴定。取不同时间点的细胞在倒置显微镜下观察细胞形态变化,双重免疫荧光染色观察细胞生长过程的分化状态。结果细胞形态观察提示:6¹4 d细胞呈均匀扁平多角状,16 d后部分细胞肥大增生,呈成熟状态。免疫组化染色显示:GFAP（+）细胞达97%。免疫荧光双重标记发现:16 d后细胞表达vimentin和nestin这两种蛋白减弱。结论本实验技术可获得纯度高,形态和功能良好,表达稳定的大鼠脑皮质未成熟星形胶细胞。 

【文章来源】：中华临床医师杂志(电子版). 2015,9(11)

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【部分图文】：

未成熟星形胶质细胞ci

·2146·中华临床医师杂志(电子版)2015年6月第9卷第11期ChinJClinicians(ElectronicEdition),June1,2015,Vol.9,No.11二、不同时间点大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的形态学观察在显微镜下观察传代培养6～14d内细胞形态相近，为扁平、多角状，胞质丰富。16d后发现部分星形胶质细胞部分开始肥大增生，呈成熟状态（图2）。三、GFAP、vimentin和GFAP、nestin双重免疫荧光检测在GFAP、vimentin和GFAP、nestin双重免疫荧光染色中可见GFAP、vimentin和GFAP、nestin在6～14d阳性表达，16d后vimentin、nestin表达减弱。见图3，4。讨论近年来，随着各种细胞学研究技术的进步，各种细胞提取分离技术日趋成熟，但是未成熟星形胶质细胞的提取及鉴定还存在很多难题。首先是未成熟星形胶质细胞容易对机械损伤产生应激反应，不但细胞的超微结构变化明显，而且蛋白质的分泌也会产生相应的变化[4-5]。目前解决此难题的办法只能

【参考文献】：
期刊论文
[1]改良的酶消化后植块法体外培养雪旺细胞[J]. 王辉,罗伦,李文胜,粱朝峰,何海勇,郭英.  中华神经医学杂志. 2011 (05)
[2]大鼠脑星形胶质细胞液压冲击损伤后蛋白质差异表达研究[J]. 于宝国,秦晓静,杨术旺,何滔,张永亮.  中华创伤杂志. 2010 (06)
[3]差速贴壁技术对大鼠脑皮质星形胶质细胞纯化率的影响[J]. 周欣,明晓云,康颂建,白波,段耀奎.  中国组织工程研究与临床康复. 2007(15)
[4]新生大鼠高纯度少突胶质前体细胞系细胞的培养与鉴定:改良振荡分离纯化法的特点[J]. 殷红兵,丁爱石,吴卫平,范明.  中国临床康复. 2005(17)

硕士论文
[1]脂多糖体外刺激对未成熟星形胶质细胞氧化损伤的机制研究[D]. 李亚红.浙江大学 2013
[2]Nkx6.1在星形胶质细胞发育过程中的作用[D]. 黄浩.杭州师范大学 2012



本文编号：3139673

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