DC-T细胞信息传递的节律、温度变化及中药调节

发布时间：2017-04-20 15:14

本文关键词：DC-T细胞信息传递的节律、温度变化及中药调节，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的树突状细胞（dendritic cell, DC）作为免疫系统的哨兵，是机体粘膜屏障的重要固有免疫细胞，亦是体内功能最强大的专职性抗原递呈细胞，在启动和调节适应性免疫应答中发挥重要的桥梁作用。DC依赖其表面受体感知外界信号变化，并利用多种分子将刺激信号传递给初始T淋巴细胞，引起T细胞向各亚群极化，从而介导多种形式的适应性免疫应答。因此，DC、T细胞之间的信号传递模式，成为左右机体免疫应答结局的重要分子基础，特别是在应对环境因素变化时，DC-T细胞间信号传递尤为重要，但目前这一领域研究成果较少，无法精确指导免疫治疗应用策略。中药玉屏风散，是防邪入侵的经典方剂，具有广泛的抗菌、抗病毒、免疫调节及增强免疫功能等作用。本研究拟探讨自然环境因素（昼夜节律、温度变化）对小鼠DC表型和功能相关分子及DC-T细胞间信息传递主要相关分子的影响，并通过中药玉屏风散的干预，系统认识玉屏风散调节DC-T细胞间异常信息交流的作用机制。方法 1.中药玉屏风散的制备：防风、黄芪、白术按1:2:2比例配伍，采用常规水煎醇沉法制备。 2.节律变化实验：在8AM、12AM、4PM、8PM、12PM等各时间点分离小鼠外周血、脾脏、肺脏、淋巴结各脏器单个核细胞，采用流式细胞术（FACS）特异性荧光抗体标记方法，检测DC表面主要特征分子MHC-II、共刺激分子CD86的节律变化；采用流式细胞仪胞内外因子双染法检测T细胞亚群Th1(CD3+CD4+IFN-γ+)、Th2(CD3+CD4+IL-4+)、Th17(CD3+CD4+IL-17+)、Treg(CD4+CD25+foxp3+)的节律变化。 3.低温变化实验：小鼠随机分为室温（25℃）对照组、低温（10℃）模型组、玉屏风小、中、大剂量组，分离各组脾脏、外周血、淋巴结及肺脏单个核细胞，采用流式细胞术特异性荧光抗体标记方法，检测DC表面主要特征分子MHC-II、CCR7及共刺激分子CD86受低温及中药玉屏风散的调节作用；采用流式细胞仪胞内外因子双染法检测T细胞亚群Th1(CD3+CD4+IFN-γ+)、 Th2(CD3+CD4+IL-4+)、 Th17(CD3+CD4+IL-17+)及Treg(CD4+CD25+foxp3+)受上述因素变化的影响。 4.采用RT-PCR技术检测DC主要功能相关分子CD86、CCR7、IL-4、IL-6、IL-12、TGF-β mRNA的转录水平。结果 1.小鼠DC表型功能分子及T细胞各亚群的表达呈现节律性变化流式细胞术检测来源于淋巴结、外周血、肺脏等不同组织的DC在8AM、12AM、4PM、8PM、12PM不同时间点其主要表型分子MHC-II及共刺激分子CD86的表达，结果显示：MHC-Ⅱ及CD86的表达呈现节律变化，在8AM时为基础水平，8AM~12AM之间表达逐渐升高，12AM至高峰。随时间变化，到4PM逐渐下降，之后8PM~12PM则呈现维持基础水平的小幅波动。T细胞各亚群Th1、Th2、Th17、Treg的节律变化与DC主要表型功能分子MHC-Ⅱ及CD86一致，各细胞亚群的表达亦是8AM~12AM逐渐升高，12AM至高峰，之后逐渐下降，呈现较低水平的波动。 2.低温条件下小鼠DC表型功能分子表达及T细胞各亚群比例降低与室温对照组（25℃）相比，低温模型组（10℃）小鼠肛温降低(p0.05)；FACS检测结果显示DC表面分子MHC-II的表达下降达15%以上(p0.05)；低温（10℃）时，DC表面功能分子CCR7、共刺激分子CD86及其mRNA的表达均明显降低(p0.05)；RT-PCR结果显示DC主要功能相关分子IL-4、IL-6、TGF-β mRNA的表达亦显著降低(p0.05)；低温条件下，T细胞各亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例及Th1/Th2、Th17/Treg比值的变化与前述DC主要功能分子的变化一致，均显著下降(p0.05)。 3.中药玉屏风散显著逆转低温诱导的DC-T细胞间异常信息传递流式结果显示：与低温模型组相比，中药玉屏风散显著提高DC表面主要分子MHC-II的表达(p0.05)，趋化因子受体CCR7、共刺激分子CD86及其mRNA的表达均明显提高(p0.05)，玉屏风散可降低IL-4mRNA的表达，但对DC其他功能相关分子IL-6、IL-12、TGF-β mRNA的表达无显著影响；玉屏风散对Th1亚群细胞比例影响无显著差异，但通过降低Th2亚群细胞比例，使Th1/Th2比值有所逆转(p0.05)，，玉屏风散组Th17亚群细胞比例有所升高，而调节性Treg细胞亚群比例降低(p0.05)。结论 1．DC-T细胞间信息传递呈现节律性变化：DC表型功能分子及T细胞各亚群的表达水平是上午较下午高，中午12点达峰值，之后呈较低水平的节律性波动。 2.低温条件下，DC表型功能分子MHC-II、CCR7、CD86的表达及T细胞各亚群细胞比例表达降低，DC-T细胞间信息传递受抑制。 3.中药玉屏风散通过提高DC表面MHC-II、CCR7、CD86分子表达、Th1/Th2比值及Th17亚群细胞比例，降低Treg亚群比例，逆转低温引起上述因子的变化，增强DC-T细胞间信息交流。
【关键词】：树突状细胞 MHC-II T淋巴细胞 玉屏风散
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
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