人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系的建立

发布时间：2017-04-24 11:05

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【摘要】：目的拟建立人胚胎干细胞无血清无饲养层的培养体系。方法将干细胞分别置于Knockout培养基(第1组)、自制无血清培养基(第2组)和添加bFGF及肝素的改良无血清培养基(第3组)中培养25代后观察比较3组干细胞形态学变化、克隆数目及大小。并借助细胞免疫组化、流式细胞术和体外拟胚体形成等方法检测干细胞的未分化状态和全能性。结果传代25次后,第2组克隆逐渐分化。第1组和第3组的干细胞均呈典型的人胚胎干细胞形态特征;细胞表达Nanog,Oct-4,Tra-1-60,SSEA-4,但不表达SSEA-1;流式检测也显示SSEA-4高表达,SSEA-1低表达;体外分化能形成拟胚体。通过单位视野下克隆个数及大小的比较,结果显示第2组与第1组和第3组间的差异显著。结论本研究通过改良本实验室已获得国家专利的无血清培养基,初步建立了人胚胎干细胞无血清无饲养层培养体系,培养效果与公认培养体系无明显差异。
【作者单位】： 南昌大学第二附属医院血液科;南昌大学研究生院医学部;南昌大学第二附属医院血液病研究所;
【关键词】： 人胚胎干细胞 自制无血清 无饲养层 bFGF 肝素
【基金】：国家自然科学基金(30760261) 国家大学生创新性实验计划(07-17) 江西省青年科学家培养对象计划项目(2007DQ0014)
【分类号】：R329
【正文快照】： 人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,HESc)自1998年在体外成功分离和建系以来[1],很多学者对其进行了深入研究。传统的HESc培养需要灭活的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibro-blast,MEF)和胎牛血清的支持[1]。但由于饲养层制备繁琐,分泌成分不明;血清中含有已知和

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本文编号：324057