一种新的快速扩增EBV和CMV特异性T细胞技术用于过继细胞治疗的实验研究
发布时间：2021-06-30 19:36
在过去的十年间，造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）领域取得了一些重要进展，提高了患者的生存率，但病毒感染仍然是移植相关死亡的一个重要危险因素。造血干细胞移植后患者免疫力低下，疱疹病毒特别是EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）和巨细胞病毒（cytomegaoviyns,CMV）是异基因造血干细胞移植后最常见的病毒感染。无论是EB病毒原发性感染或是巨细胞病毒的再活化，都可能会危及患者的生命。移植后EBV感染的常规治疗包括降低免疫抑制剂量、抗病毒药物、CD20单克隆抗体、化疗以及抗原特异性T细胞输注等。单纯的减少或者停用免疫抑制剂会增加移植物抗宿主病的风险，阿昔洛韦或更昔洛韦等抗病毒药物抑制病毒在体内的复制，而EBV和CMV进入体内后为细胞内感染且大部分处于潜伏周期，处于此阶段的感染，抗病毒药物对之无效。尽管很多病例报道了CD20单克隆抗体治疗移植后淋巴组织增生性疾病（post-transplant lymphoproliferativediseases, PTLD）的有效性，但它会导致超过6个月的B...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EBVLMP1Ag159-167的质谱鉴定（左）和纯度分析结果（右）
图 1.2 EBV LMP1Ag159-167 的质谱鉴定（左）和纯度分析结果（右）BV-LCL 的形态学观察 EBV 上清与人外周血单个核细胞培养 2～3 天后，倒置显微镜下可见淋巴细胞形态增大，明显母细胞化，胞质丰富，悬浮生长。培观察，可见大量的集落，聚集成团(图 1.3)，培养液颜色变成黄色L 适宜在偏酸性环境生长，故每次可以半换液。EBV-LCL 细胞可稳定传代。BV-LCL 表面抗原的鉴定表达用流式细胞仪检测 EBV-LCL 表面分子 CD19 的表达，可见培养前占 3.45%。培养 4 周后，B 细胞表面标记占 98.67%，证明此细胞（图 1.4）。
1.12 统计学分析实验数据采用SPSS16.0进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间均数的比较采用重复测量方差分析，组间两两比较用最小显著差法(LSD)。以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 细胞形态学观察种板时，复苏的 PBMC，显微镜下观察可见细胞圆形、大小不等，透亮度较好。培养前三天，细胞形态无明显变化，显微镜下可见少量的细胞碎片。培养一周左右，部分细胞体积变大，可见细胞集落形成。0μmol/L 组和 1μmol/L 组细胞均长势良好，5μmol/L 组细胞形成克隆的数目则明显减少，倒置显微镜下可以观察到较多的细胞碎片。流式细胞仪检测培养 14 天的细胞，与培养前的 PBMC相比，细胞体积明显增大，5μmol/L 组细胞可见较多的碎片，如图 2.1。
【参考文献】：
期刊论文
[1]异基因造血干细胞移植后发生巨细胞病毒感染的临床分析[J]. 郭智,陈惠仁,刘晓东,边佳明,何学鹏,楼金星,陈鹏,杨凯,刘丹,张媛. 中国实验血液学杂志. 2012(04)
[2]CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用[J]. 谢富佳,谭继英,乔梅,梁正羽,王世婷,唐克峰,祝秉东,杨燕,章国平. 中国病原生物学杂志. 2011(09)
[3]河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析[J]. 王兆福,张伯伟,马茹,杜娟,孔大为. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(31)
[4]应用ELISPOT方法筛选确定HIV-1 B’/C亚型疫苗六种抗原的H-2d限制的T细胞表位[J]. 齐香荣,高瑛瑛,陆柔剑,邓瑶,孟昕,谭文杰,阮力. 病毒学报. 2011(01)
[5]HLA高分辨分型模棱两可组合研究和问题解决的进展[J]. 李恒聪,吴国光. 中国实验血液学杂志. 2010(05)
[6]自体CIK细胞过继免疫治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究[J]. 李文,宋立强,刘吉福. 陕西医学杂志. 2010(02)
[7]人B淋巴母细胞系体外培养方法的优化及其影响因素[J]. 刘敏娟,孙静,许云云,臧志远,刘柳,张学光. 苏州大学学报(医学版). 2010(01)
[8]36380名河北汉族HLA供者基因多态性及其分布特征[J]. 王振雷,何路军,刘艳平,乔芳,张飒,赵倩,王远花,谢续,李茵. 中国输血杂志. 2008(03)
[9]儿童造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的临床研究[J]. 秦茂权,谢正德,王彬,周翾,朱光华,冯涛,吴敏媛. 临床儿科杂志. 2007(07)
[10]20596名汉族造血干细胞供者HLA多态性统计学分析[J]. 孙继丽,杜可明,傅敏,孙瑛,金晔,谢军华,季芸,杨健豪,稽月华,张铮,毛臻,刘达庄,钱开诚. 中国输血杂志. 2006(05)
博士论文
[1]EB病毒潜伏膜蛋白2A特异性CTL表位筛选及免疫功能研究[D]. 王冰.南京医科大学 2009
本文编号：3258359
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：125 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EBVLMP1Ag159-167的质谱鉴定（左）和纯度分析结果（右）
图 1.2 EBV LMP1Ag159-167 的质谱鉴定（左）和纯度分析结果（右）BV-LCL 的形态学观察 EBV 上清与人外周血单个核细胞培养 2～3 天后，倒置显微镜下可见淋巴细胞形态增大，明显母细胞化，胞质丰富，悬浮生长。培观察，可见大量的集落，聚集成团(图 1.3)，培养液颜色变成黄色L 适宜在偏酸性环境生长，故每次可以半换液。EBV-LCL 细胞可稳定传代。BV-LCL 表面抗原的鉴定表达用流式细胞仪检测 EBV-LCL 表面分子 CD19 的表达，可见培养前占 3.45%。培养 4 周后，B 细胞表面标记占 98.67%，证明此细胞（图 1.4）。
1.12 统计学分析实验数据采用SPSS16.0进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间均数的比较采用重复测量方差分析，组间两两比较用最小显著差法(LSD)。以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果2.1 细胞形态学观察种板时，复苏的 PBMC，显微镜下观察可见细胞圆形、大小不等，透亮度较好。培养前三天，细胞形态无明显变化，显微镜下可见少量的细胞碎片。培养一周左右，部分细胞体积变大，可见细胞集落形成。0μmol/L 组和 1μmol/L 组细胞均长势良好，5μmol/L 组细胞形成克隆的数目则明显减少，倒置显微镜下可以观察到较多的细胞碎片。流式细胞仪检测培养 14 天的细胞，与培养前的 PBMC相比，细胞体积明显增大，5μmol/L 组细胞可见较多的碎片，如图 2.1。
【参考文献】：
期刊论文
[1]异基因造血干细胞移植后发生巨细胞病毒感染的临床分析[J]. 郭智,陈惠仁,刘晓东,边佳明,何学鹏,楼金星,陈鹏,杨凯,刘丹,张媛. 中国实验血液学杂志. 2012(04)
[2]CFP21-ELISPOT方法的建立及其在结核分枝杆菌感染诊断中的应用[J]. 谢富佳,谭继英,乔梅,梁正羽,王世婷,唐克峰,祝秉东,杨燕,章国平. 中国病原生物学杂志. 2011(09)
[3]河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析[J]. 王兆福,张伯伟,马茹,杜娟,孔大为. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(31)
[4]应用ELISPOT方法筛选确定HIV-1 B’/C亚型疫苗六种抗原的H-2d限制的T细胞表位[J]. 齐香荣,高瑛瑛,陆柔剑,邓瑶,孟昕,谭文杰,阮力. 病毒学报. 2011(01)
[5]HLA高分辨分型模棱两可组合研究和问题解决的进展[J]. 李恒聪,吴国光. 中国实验血液学杂志. 2010(05)
[6]自体CIK细胞过继免疫治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究[J]. 李文,宋立强,刘吉福. 陕西医学杂志. 2010(02)
[7]人B淋巴母细胞系体外培养方法的优化及其影响因素[J]. 刘敏娟,孙静,许云云,臧志远,刘柳,张学光. 苏州大学学报(医学版). 2010(01)
[8]36380名河北汉族HLA供者基因多态性及其分布特征[J]. 王振雷,何路军,刘艳平,乔芳,张飒,赵倩,王远花,谢续,李茵. 中国输血杂志. 2008(03)
[9]儿童造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的临床研究[J]. 秦茂权,谢正德,王彬,周翾,朱光华,冯涛,吴敏媛. 临床儿科杂志. 2007(07)
[10]20596名汉族造血干细胞供者HLA多态性统计学分析[J]. 孙继丽,杜可明,傅敏,孙瑛,金晔,谢军华,季芸,杨健豪,稽月华,张铮,毛臻,刘达庄,钱开诚. 中国输血杂志. 2006(05)
博士论文
[1]EB病毒潜伏膜蛋白2A特异性CTL表位筛选及免疫功能研究[D]. 王冰.南京医科大学 2009
本文编号：3258359
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