SREBP-1c对骨骼肌细胞IRS-1表达调控的影响

发布时间：2017-04-26 17:17

  本文关键词：SREBP-1c对骨骼肌细胞IRS-1表达调控的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨固醇调节元件结合蛋白-1c (SREBP-1c)对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)表达调控的影响。 方法：采用酶联合消化法取2-3d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为对照组(C)、对照+胰岛素组(C+I)、高脂组(PA)及高脂+胰岛素组(PA+I)。将L6骨骼肌细胞诱导分化直至肌管结构出现,将L6细胞分为对照组(C)、对照+胰岛素组(C+I)、高脂组(PA)、高脂+胰岛素组(PA+I)、高脂+二甲双胍组(PA+MET)。将表达SREBP-1c腺病毒转染L6细胞,根据感染复数(MOI)分为含绿色荧光蛋白阴性载体(GFP)组、MOI值为5、50、100、200组。将靶基因为SREBP-1c的干扰RNA (siRNA)转染L6细胞,并分为空白对照组、阴性siRNA组及SREBP-1c siRNA组。免疫荧光法鉴定原代骨骼肌细胞,油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况,Western blotting和实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测SREBP-1c、IRS-1、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)基因及蛋白表达。多组资料比较采用方差分析,两两比较采用最小差异显著差异法。 结果：(1)将原代细胞行结蛋白免疫荧光染色,90%以上的细胞胞浆染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。高脂处理原代细胞24h后,行油红O染色,骨骼肌细胞内出现大量红色脂滴。 (2)与C组相比,PA组SREBP-1c基因和蛋白水平升高(均P0.05),IRS-1基因和蛋白水平降低(均P0.05),丝氨酸磷酸化IRS-1蛋白表达升高,酪氨酸磷酸化IRS-1和丝氨酸磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达下降(均P0.05)。 (3)与GFP组相比,MOI值为50、100和200组的SREBP-1c基因和蛋白表达呈剂量依赖性上升(均P0.05),IRS-1基因和蛋白表达水平呈剂量依赖性下降(均P0.05)。MOI值为50和100组酪氨酸磷酸化IRS-1和p-Akt蛋白表达均显著下降(均P0.05)。 (4)与空白对照组和阴性siRNA组相比,SREBP-1c siRNA组SREBP-1c基因和蛋白水平降低(均P0.05),IRS-1蛋白表达升高(均P0.05) (5)与PA组相比,PA+I组和PA+MET组苏氨酸磷酸化AMPK、酪氨酸磷酸化IRS-1和p-Akt蛋白表达均显著上升(均P0.05),丝氨酸磷酸化mTOR口SREBP-1c蛋白水平降低(均P0.05)。 结论：SREBP-1c可抑制骨骼肌IRS-1胰岛素信号通路,参与肌细胞胰岛素抵抗的发生；另外,胰岛素和二甲双胍可抑制高脂时骨骼肌mTOR-SREBP-1c通路的表达,改善脂毒性导致的胰岛素抵抗。
【关键词】：固醇调节元件结合蛋白-1c 胰岛素受体底物1 胰岛素抵抗 骨骼肌细胞 棕榈酸
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 目录3-5
• 本文主要的英汉名词~.略对照表5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 一、实验材料15-22
• 二、实验方法22-28
• 三、结果28-41
• 第一部分28-34
• 第二部分34-37
• 第三部分37-39
• 第四部分39-41
• 四、讨论41-44
• 五、结论44
• 参考文献44-50
• 文献综述50-64
• 参考文献57-64
• 附录64-65
• 致谢65

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本文编号：328901