裸鼠小肝综合征模型的建立和肝细胞再生特点

发布时间：2017-04-26 22:13

  本文关键词：裸鼠小肝综合征模型的建立和肝细胞再生特点，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过肝大部切除术建立裸鼠小肝综合征模型。通过生存曲线、肝功能检测、肝脏活检及病理学检测，对模型进行评价。探讨小肝综合征模型建立的方法、可行性、条件及其肝细胞再生特性。方法：先取10只裸鼠进行肝脏解剖，对其进行在体及离体肝脏解剖学观察。了解肝脏解剖结构、裸鼠肝脏与体重的百分比和各肝叶占肝脏的比重。制定肝叶切除方法，熟练肝大部切除术。将40只幼龄裸鼠（5周龄,体重22.3±1.8g）随机分为4组，每组10只，进行不同比例的肝部分切除术。分别为组1：切除25%肝组织；组2：切除50%肝组织；组3：切除75%肝组织；组4：切除80%肝组织。观察裸鼠术后的生存状况、生存时间(d），统计其生存曲线；手术前1h和手术后1、4、7、14、21、28d各组裸鼠经心脏穿刺取血0.1ml，测定血清谷丙转氨酶（Alanine transaminase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、总胆红素（totalbilirubin,TBIL）、白蛋白（albumin,ALB）值。术中切除的正常肝组织及手术后2、7、28、60d时行裸鼠肝组织活检（死亡裸鼠及时尸解和肝组织标本取检），行苏木精-伊红染色法(hematoxylin and eosin stain,HE)染色、病理组织学光镜观察；同时，标本行肝细胞生长因子(hepatocytegrowth factor,HGF)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的免疫组化检测。组间数据的比较采用重复测量方差分析，检验水准а=0.05，P0.05具有统计学意义。结果：①裸鼠肝脏大致分为六叶，约占体重的（3.63±0.05）%，其中左叶占肝脏比例为（38.44±0.41）%，中叶占（26.44±0.59）%，三角叶占（14.08±0.33）%，，尾状叶占（11.84±0.53）%，右上叶占（3.49±0.28）%，右下叶占（5.71±0.22）%。②组1、2、3、4裸鼠术后60d存活率分别为100%、100%、70%和20%。③肝组织大体观察：术前裸鼠肝脏色泽红润，质地柔软。肝叶切除术后死亡裸鼠进行解剖尸检可见剩余肝脏组织色泽黄，呈淤胆状态，不同程度的脂肪变性，淤血肿胀，体积增大，质地较正常肝组织稍硬，腹腔可见少量腹水。术后第2d，组1、2肝组织色泽红润,质地软；组3、4术后肝组织颜色稍暗，质地稍硬，其中组4腹腔中有少量腹水。术后第7d，组1、2肝组织红润,质地柔软，肝脏组织体积再生；组3、4可见肝脏组织颜色较之前红润，质地较正常肝组织稍硬，但有部分裸鼠残留肝组织外观有脂肪肝样变化。术后28d可见组1、2、3、4肝脏组织体积几乎与术前肝脏体积相等,组3、4肝脏组织颜色较之前红润，质地柔软。术后第60d处死裸鼠后切取肝脏，可见各组肝脏体积较术前明显增大，重量较术前平均值增加，肝重占比明显增加。④组1术前、术后ALT、AST、IBIL值无明显变化。组2术后1d ALT、AST、IBIL均轻度升高，术后第4d逐渐下降，术后第7d成稳定状态。术后第1d,组3、4裸鼠ALT、AST、IBIL值均明显升高。组4ALT达到520.42±28.35U/L、AST447.10±56.45U/L、TBIL9.10±0.35umol/L。术后第1d,组3、4ALB值明显下降,组4裸鼠ALB最低，为32.42±1.83U/L。⑤HE染色：术前所取得正常肝脏组织行HE染色示:中央静脉清晰,肝细胞胞质及胞核清晰,无炎细胞浸润。组1、2术后第2d获取的肝组织标本HE染色显示:中央静脉轻度淤血,间质稍水肿、肝细胞浆疏松,中央静脉和肝窦轻度扩张,汇管区有少量炎细胞浸润；术后第60d基本恢复正常肝脏组织结构。组3术后第2d肝脏活检HE染色示:中央静脉中度淤血,间质水肿,窦内有明显的血栓形成,散在的肝细胞坏死，少量细胞空泡化，汇管区存在较多炎细胞浸润。术后60d可见肝窦稍扩张，胞质及细胞核清晰。组4术后第2d肝脏活检HE染色示中央静脉重度淤血、大片的肝细胞坏死。术后60d可见少许肝细胞空泡化呈气球样变、细胞脂肪变性，但有明显肝细胞再生。⑥术前取得的正常的肝组织标本中无IL-6免疫阳性物表达,而组1术后肝细胞细胞质可见少量棕黄色IL-6免疫阳性物表达；组2、3术后第2d可见少量的IL-6免疫阳性物表达，术后7d可见大量的IL-6免疫阳性物表达，术后28、60d IL-6免疫阳性物表达逐渐下降；组4术后第2、7d可见IL-6阳性表达，术后28、60d阳性表达下降，死亡的裸鼠肝组织中可见少量的IL-6免疫阳性物表达。⑦HGF在术前的正常裸鼠肝组织内表达很少。而在术后组1裸鼠肝组织中可见HGF少量的表达；组2术后第2d、7d裸鼠肝组织中可见HGF大量表达，术后28、60d表达逐渐降低；组3、4中术后2d、7d可见大量的HGF表达的同时可见肝组织碎片状坏死，术后28d、60d HGF阳性表达下降。 结论：1．切除80%裸鼠肝脏可成功建立小肝综合征裸鼠模型。2．裸鼠肝脏切除后IL-6、HGF表达增加，与肝细胞再生有关。
【关键词】：裸鼠 肝脏 小肝综合征 模型
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R657.3;R-332
【目录】：

• 目录3-4
• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-18
• 结果18-34
• 讨论34-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 英汉缩略词对照表43-44
• 致谢44-45
• 综述45-62
• 参考文献55-62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 杨永平;;肝细胞移植:临床应用及实验室研究[J];传染病信息;2005年03期

2 徐葵花;赵守松;;肝细胞移植治疗肝功能衰竭的研究进展[J];实用肝脏病杂志;2006年03期

3 吕春燕;马跃荣;;小鼠心脏穿刺采血并存活的几点注意事项[J];泸州医学院学报;2006年03期

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本文编号：329324