锦灯笼果实多糖对小鼠髓源树突状细胞表型影响及其作用受体初探

发布时间：2017-04-27 01:13

  本文关键词：锦灯笼果实多糖对小鼠髓源树突状细胞表型影响及其作用受体初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,随着对植物多糖研究的不断发展,人们发现很多植物多糖都具有良好的免疫调节功能。本课题组已经对锦灯笼果实水溶性多糖(PPSB)的佐剂活性进行研究,实验结果表明PPSB在白色念珠菌核酸疫苗中具有显著的免疫增强作用。然而,对于PPSB具有佐剂效应的作用机制知之甚少。 研究表明,疫苗佐剂辅助抗原激发机体产生免疫反应几乎都与树突状细胞(Dendriric cells,DC)的作用有关,DC的成熟是启动特异免疫应答的一个关键步骤,而DC表达的Toll样受(Toll-Like Receptors,TLRs)是连接固有免疫和适应性免疫应答的桥梁。 本论文以DC为切入点,以TLR4为靶点,对PPSB的免疫增强作用机制进行初步探讨。现将本论文主要研究结果归纳如下： 1.建立了体外培养获得小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow derived dendritic cells,BMDC)的技术体系 本实验采用两种方法诱导生成BMDC,并对两种方法产生的BMDC进行形态学观察和表型鉴定。结果显示,单独使用rmGM-CSF诱导培养至第8天,仅获得较低比率的BMDC,而共同使用rmGM-CSF和rmIL-4诱导培养至第5天时,可获得大量较高比率的未成熟BMDC,因此,本实验采用共同使用rmGM-CSF和rmIL-4诱导培养法,第5天获得未成熟状态的BMDC用于后续实验。 2. PPSB促进BMDC表面共刺激分子CD80、CD86的表达 选取上述诱导产生的BMDC进行后续实验,进一步探讨不同剂量的PPSB对BMDC表型的影响,采用流式细胞仪分别检测不同剂量的PPSB对BMDC表面共刺激分子CD80、CD86表达水平的影响。研究结果显示,与对照组相比,PPSB可以不同程度的促进CD80、CD86的表达,且在10-50ug/ml浓度范围内,呈剂量依赖关系,说明PPSB具有促进BMDC表型成熟的作用。 3. PPSB能够抑制脂多糖(LPS)与BMDC的结合 为研究PPSB与BMDC的特异性结合情况,本实验分别用不同浓度的PPSB和FITC-LPS竞争性结合BMDC表面的TLR4,并以未标记的LPS和FITC-LPS与BMDC结合作对照,然后用流式细胞仪检测细胞结合荧光情况。结果显示不同浓度的PPSB均能不同程度的抑制FITC-LPS与BMDC的结合,并且随着PPSB浓度的升高,FITC-LPS与BMDC结合的抑制效果依次增强,初步推测PPSB在BMDC表面的受体为TLR4。
【关键词】：锦灯笼多糖 树突状细胞 TLR4 佐剂
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392;Q946
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 中英文~.写9-10
• 第一章 引言10-20
• 1 多糖特异性免疫识别分子机制的研究现状10-13
• 1.1 植物多糖对巨噬细胞的影响10-11
• 1.2 植物多糖对DC的影响11-12
• 1.3 植物多糖受体12-13
• 2 DC概述13-15
• 2.1 DC的发现13
• 2.2 DC在免疫应答中的地位13
• 2.3 DC的来源、分类和分布13-14
• 2.4 DC的分化与成熟14
• 2.5 成熟DC诱导初始型T细胞极化过程14-15
• 3 TLRs概述15-17
• 3.1 TLRs的基本结构及其信号通路15-16
• 3.2 TLRs在免疫应答中的作用16-17
• 4 锦灯笼的研究现状17-19
• 4.1 锦灯笼的生物学特征和化学成分17
• 4.2 锦灯笼的药理学研究概况17-19
• 5 本研究目的意义19-20
• 第二章 实验材料与方法20-27
• 1 实验材料及仪器20-21
• 1.1 实验材料20
• 1.2 实验试剂20
• 1.3 实验仪器20-21
• 1.4 实验动物21
• 2 实验方法21-27
• 2.1 BMDC的体外诱导培养及鉴定21-24
• 2.2 流式细胞仪检测PPSB对BMDC表型的影响24-25
• 2.3 流式细胞仪检测PPSB与BMDC特异性结合情况25-26
• 2.4 统计分析26-27
• 第三章 实验结果与分析27-37
• 1 BMDC的鉴定27-30
• 1.1 倒置显微镜下对细胞进行形态学观察27-28
• 1.2 细胞表面分子表达水平的检测与分析28-30
• 2 PPSB对BMDC表型成熟的影响30-34
• 2.1 PPSB能够促进BMDC表面共刺激分子CD80的表达31-33
• 2.2 PPSB能够促进BMDC表面共刺激分子CD86的表达33-34
• 3 PPSB与BMDC表面受体TLR4特异性结合情况分析34-37
• 第四章 讨论37-40
• 1 体外扩增培养法可以获得大量较高比率的BMDC37-38
• 2 PPSB促进BMDC表面CD80、CD86的表达38-39
• 3 PPSB能够抑制LPS与BMDC的结合39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 致谢44

【参考文献】

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本文编号：329639