6-羟多巴胺去除股动脉交感神经的动物模型建立及相关研究

发布时间：2017-04-27 03:00

  本文关键词：6-羟多巴胺去除股动脉交感神经的动物模型建立及相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：多种原因所导致的大范围骨缺损、骨不连的修复，一直是骨科领域的一项世界性难题，，至今尚未得到有效解决。目前常用的修复方法有自体骨移植和异体骨移植，但这些方法都存有各自缺点，限制了其临床应用，难以达到满意的效果。骨组织工程的出现提供了全新的思路和方法，采用组织工程技术构建的骨移植物可以满足缺损的不同形状和大小要求。 血液的供应和神经支配在人体组织和器官的发生、发育和成熟过程中都起到至关重要的作用；血管化、神经化的组织工程骨的构建是其由实验室走向临床的重要环节和关键技术。我们以往的研究证实了血管束、感觉神经束移植在组织工程骨神经化的形成中具有同等的作用，并可显著促进骨的形成。然而，该血管束富含交感神经纤维，其神经化作用是血管本身的作用、还是血管壁上的交感神经的作用？仍然是一个未知的问题。因此，本实验通过6-OHDA化学性去交感神经的方法去除兔股动脉交感神经纤维，建立兔股动脉去交感神经模型，对比去交感神经血管与含交感神经血管对组织工程骨神经化的作用及其骨缺损修复效果进行单因素分析，以探明血管束的神经化作用究竟是血管本身的作用，还是血管壁上交感神经的独立作用。 第一部分明确股动脉、股静脉交感神经分布情况，确定6-OHDA最佳浓度 目的： 1、通过乙醛酸单胺荧光染色方法明确股动脉、股静脉交感神经分布。 2、通过对比不同浓度6-OHDA去交感神经效果，确定药物最佳浓度。 方法： 1、获取健康新西兰兔的股动脉、股静脉，剔除周围组织，使用乙醛酸激发单胺荧光染色检测股动脉、股静脉交感神经分布。2、分离新西兰兔股动脉采用不同浓度药物处理。按照所使用6-OHDA浓度的不同，将实验组分为0.05mg/mL、0.075mg/mL、0.1mg/mL和0.125mg/mL组，每组各4只兔子。实验组采用Krebs缓冲液含不同浓度的6-OHDA和质量百分比为0.1%的抗坏血酸处理；对照组采用Krebs缓冲液仅含0.1%的抗坏血酸，对照组使用4只兔子。分别用乙醛酸激发单胺荧光染色检测股动脉组织变化、交感神经分布，并通过Western blot表明检测酪酸羟化酶（TH）蛋白表达水平的差异。 结果： 1、乙醛酸染色表明：股动脉、股静脉中均有交感神经分布，股动脉有密集的交感神经呈网状和放射状分布，而股静脉交感神经分布比较稀疏。2、乙醛酸染色表明：与对照组相比，0.05mg/mL和0.075mg/mL组交感神经减少不明显，0.1mg/mL和0.125mg/mL组交感神经显著减少；对照组、0.05mg/mL组、0.075mg/mL组、0.1mg/mL组和0.125mg/mL组荧光OD值平均分别为32.43±8.02、31.05±7.81、25.76±8.60、14.98±3.89、15.36±5.20。0.05mg/mL和0.075mg/mL组交感神经含量与对照组相比差异均无统计学意义（P0.05）；0.1mg/mL和0.125mg/mL组交感神经含量与对照组相比，差异均有统计学意义（P0.05）。0.1mg/mL组和0.125mg/mL组相比，差异无统计学意义（P0.05）。TH与内参蛋白β-actin荧光强度扫描结果比值的统计结果：对照组、0.05mg/mL组、0.075mg/mL组、0.1mg/mL组和0.125mg/mL组TH/β-actin比值平均分别为0.70±0.08、0.63±0.12、0.61±0.11、0.19±0.08、0.19±0.06。Western blot表明：0.1mg/mL组和0.125mg/mL组与对照组相比蛋白表达量均显著减少（P0.05），0.05mg/mL组和0.075mg/mL组与对照组相比，差异均无统计学意义（P0.05）。 结论： 1、股动脉、股静脉中均有大量交感神经纤维分布。2、6-OHDA去除股动脉交感神经的最佳浓度为0.1mg/ml。 第二部分股动脉去交感神经动物模型的建立 目的： 探讨6-OHDA在体内去除兔股动脉交感神经的可行性，旨在为研究单纯血管本身在组织工程骨中有无神经化的作用提供理想的动物实验模型。 方法： 分离新西兰兔股动脉采用不同药物处理。实验组采用Krebs缓冲液含0.1mg/mL6-OHDA和质量百分比为0.1%的抗坏血酸处理；对照组采用Krebs缓冲液仅含0.1%的抗坏血酸，对照组使用4只兔子。为确定药物干预后交感神经恢复的时间，将实验组分为7d、14d和28d取材组，每组各4只兔子。分别用苏木精-伊红(HE)染色法、乙醛酸激发单胺荧光染色检测股动脉组织变化、交感神经分布，并通过Westernblot表明检测酪酸羟化酶（TH）和神经肽Y（NPY）蛋白表达水平的差异。 结果： HE染色表明：与对照组相比，实验组股动脉组织血管壁结构完整，无明显形态学改变。乙醛酸染色表明：对照组股动脉可见大量交感神经呈网状和放射状分布；7d和14d取材组交感神经几乎不可见，28d取材组有少量交感神经；对照组、7d取材组、14d取材组及28d取材组荧光OD值平均分别为32.40±7.42、15.30±3.79、15.20±2.18、23.65±8.20。3个取材组交感神经含量与对照组相比差异均有统计学意义（P0.05）；28d组与7d、14d组相比，差异均有统计学意义（P0.05）。TH和NPY与内参蛋白β-actin荧光强度扫描结果比值的统计结果：对照组、7d取材组、14d取材组及28d取材组TH/β-actin比值平均分别为0.70±0.08、0.19±0.08、0.20±0.06、0.33±0.06；对照组、7d取材组、14d取材组及28d取材组NPY/β-actin比值平均分别为0.68±0.14、0.14±0.02、0.17±0.02、0.53±0.10。Western blot表明：两种蛋白表达量变化趋势相同，各实验组与对照组相比蛋白表达量均显著减少（P0.05），28d组与7d、14d组相比表达量增多，差异均有统计学意义（P0.05）。 结论： 体内局部应用6-OHDA可有效去除股动脉交感神经纤维，是一种可行的血管壁去交感神经实验方法；建立了一个理想的化学去股动脉交感神经的动物模型。
【关键词】：股动脉 交感神经系统 羟多巴胺
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R651.3
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文献回顾15-23
• 1 骨组织工程15-16
• 2 交感神经系统对骨代谢的影响16
• 3 交感神经切除术16-23
• 第一部分 明确股动脉、股静脉交感神经分布情况；确定 6-OHDA 最佳浓度23-36
• 1 材料与仪器23-24
• 2 实验方法24-27
• 3 结果27-32
• 4 讨论32-36
• 第二部分 股动脉去交感神经动物模型的建立36-48
• 1 材料与仪器36-37
• 2 实验方法37-39
• 3 结果39-43
• 4 讨论43-48
• 小结48-49
• 参考文献49-59
• 个人简历和研究成果59-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王伟;张丽娟;李燕;黄海霞;刘萍;曲瑞瑶;;帕金森病模型大鼠结肠电-机械活动的改变[J];首都医科大学学报;2009年04期

2 吴珊鹏;林欣;;动脉外膜交感神经网剥脱切除术后肢体骨内压、血液流变学、神经肽改变的实验研究[J];中国医药导报;2010年36期

  本文关键词：6-羟多巴胺去除股动脉交感神经的动物模型建立及相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：329734