蜂毒干预胶原诱导型关节炎小鼠模型的蛋白质组学研究

发布时间：2017-04-27 04:02

  本文关键词：蜂毒干预胶原诱导型关节炎小鼠模型的蛋白质组学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蛋白质组学研究采用双向电泳技术、质谱技术和生物信息学等技术,从整体上、全面的、动态的分析和比较机体在不同状态下蛋白质种类和数量的改变,可借以探索某种疾病的发病机制或药物的作用机理。本研究以胶原诱导型关节炎小鼠为模型,通过蛋白质组学研究技术,探讨蜂毒治疗类风湿性关节炎发挥疗效的作用机制。主要研究内容及学术贡献如下：1.蜂毒对胶原诱导型关节炎小鼠的药效作用研究：首先采用牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂等比例混合建立关节炎小鼠模型,蜂毒干预组的小鼠按高、中、低剂量(2 mg·kg-1、1 mg·kg-1 和0.5 mg·kg-1)背部皮下注射蜂毒溶液,模型和正常对照组注射生理盐水。然后采用酶联免疫吸附试验检测各实验组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和MMP-3含量。结果显示,给药期间模型组中各血清指标极显著高于正常对照组；给药三周后蜂毒高剂量组(2mg·kg-1)中各血清指标均显著降低,与正常对照组无显著性差异。实验结果说明蜂毒可以抑制血清中炎性细胞因子合成,对胶原诱导型关节炎小鼠具有一定的治疗作用。2.血清蛋白质组学分析方法研究：首先建立血清蛋白提取方法,去除高丰度蛋白；然后对双向电泳分析过程中各关键步骤进行优化处理,包括不同规格IPG胶条的选择、上样量和等电聚焦条件的选择及优化。根据实验结果确定双向电泳的样品制备方法为三氯乙酸-丙酮(TCA/acetone)沉淀法提取血清蛋白,选用17 cm pH 4-7的IPG胶条进行等电聚焦,上样量800μg,凝胶染色方法为胶体考马斯亮蓝染色法。3.蜂毒干预类风湿关节炎小鼠模型的蛋白质组学研究：采用上述双向电泳技术对给药前和给药三周的模型、正常对照组及蜂毒高剂量组(2 mg·kg-1)小鼠血清蛋白进行分离。图像分析结果显示,给药前模型组与正常对照组间存在165个差异表达的蛋白质点；给药三周后与正常对照组相比,模型组中有36个蛋白质点表达上调,33个点表达下调；蜂毒高剂量组有28个点表达上调,23个点表达下调；与模型对照组相比,蜂毒高剂量组中有33个蛋白质点表达上调,44个点表达下调。对表达量差异显著的蛋白质点进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱鉴定,成功确定了22种蛋白质,根据其功能可以分为以下几类,细胞骨架蛋白：γ-肌动蛋白(gamma-Actin);物质运输相关蛋白：转铁蛋白(Serotransferrin)、维生素D结合蛋白(Vitamin D-binding protein,VDBP);炎症相关蛋白：触珠蛋白亚型CRA-b (Haptoglobin, isoform CRA-b)、α链触珠蛋白(Haptoglobin alpha chain)和激肽原-1亚型2(Kininogen-1 isoform 2);代谢功能相关的蛋白：载脂蛋白A-I前原蛋白(Apolipoprotein A-I preproprotein),血液蛋白：血清白蛋白前体(serum albumin precursor)。通过对差异蛋白的功能分析,揭示了蜂毒通过调节多种蛋白质与代谢系统、免疫系统间的相互作用,促进细胞凋亡以及抑制炎性因子合成等途径发挥抗类风湿性关节炎作用的机制。
【关键词】：蜂毒 类风湿型性关节炎 蛋白质组学
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R593.22;R-332
【目录】：

• 缩略词简表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 绪论12-20
• 1.1 类风湿性关节炎发病机理研究现状13-15
• 1.1.1 感染因素13-14
• 1.1.2 遗传因素14
• 1.1.3 细胞因子与RA的关系14
• 1.1.4 免疫系统与RA的关系14-15
• 1.1.5 细胞凋亡与RA的关系15
• 1.2 蜂毒治疗类风湿性关节炎的研究进展15-16
• 1.3 类风湿性关节炎的蛋白质组学研究进展16-19
• 1.3.1 CIA模型炎症关节的蛋白质组学研究16-17
• 1.3.2 滑膜组织蛋白质组学研究17
• 1.3.3 滑膜成纤维细胞的蛋白质组学研究17-18
• 1.3.4 体液(滑液、血浆、血清)蛋白质组学研究18-19
• 1.4 本研究的主要内容19-20
• 第二章 蜂毒对CIA小鼠模型药效作用研究20-28
• 2.1 材料与方法20-22
• 2.1.1 实验材料、试剂及仪器20-21
• 2.1.2 实验方法21-22
• 2.2 实验结果22-25
• 2.2.1 蜂毒对血清中TNF-α含量的影响22
• 2.2.2 蜂毒对血清中IL-1β含量的影响22-23
• 2.2.3 蜂毒对血清中IL-6含量的影响23-24
• 2.2.4 蜂毒对血清中IL-18含量的影响24-25
• 2.2.5 蜂毒对血清中MMP-3含量的影响25
• 2.3 讨论25-27
• 2.4 结论27-28
• 第三章 血清蛋白质组学分析方法的研究28-36
• 3.1 样品制备方法的选择29-31
• 3.2 IPG胶条的选择31-32
• 3.3 上样量的选择32-34
• 3.4 等电聚焦条件的选择与优化34-35
• 3.5 凝胶图像分析与质谱鉴定35-36
• 第四章 蜂毒干预类风湿关节炎小鼠模型的蛋白质组学研究36-48
• 4.1 材料与方法36-40
• 4.1.1 实验材料、试剂及仪器36-37
• 4.1.2 实验方法37-40
• 4.2 实验结果40-45
• 4.2.1 2-DE凝胶图像分析结果40-42
• 4.2.2 质谱鉴定结果42-45
• 4.3 讨论45-47
• 4.4 结论47-48
• 第五章 总结与展望48-50
• 5.1 总结48
• 5.2 展望48-50
• 参考文献50-57
• 附件57-62
• 致谢62

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