消减调节性T细胞增强幽门螺杆菌疫苗的免疫保护作用机制研究
本文关键词：消减调节性T细胞增强幽门螺杆菌疫苗的免疫保护作用机制研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的： 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染世界约50%人口，并与慢性活动性胃炎、胃溃疡和胃癌密切联系。Hp感染的机体中存在特异性调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)，抑制机体对Hp的过度免疫应答，但同时造成机体对Hp的免疫无能。本研究拟通过消减小鼠Treg细胞，研究小鼠Treg细胞在抗Hp感染的免疫保护的作用机制；同时CpG-ODN作为免疫佐剂，研究CpG-ODN能否通过TLR9通路逆转Treg细胞的抑制功能，阐明CpG-ODN增强疫苗免疫保护的机制。 方法： 1、调节性T细胞对Hp疫苗免疫保护作用机制研究：19只SPF级C57BL/6小鼠随机分成3组，①WCS+anti-CD25组：注射Hp全细胞裂解物（WCS）和弗氏佐剂的混合液；②WCS组：注射WCS和弗氏佐剂的混合液；③PBS对照组：注射PBS和弗氏佐剂的混合液。其中WCS+anti-CD25组在免疫前4d注射抗CD25抗体，1W后加强免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，，间接ELISA检测抗Hp抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻击小鼠，末次攻击4W后处死小鼠，胃组织Hp定量细菌培养评价Hp的定植水平；流式细胞术分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞、CD80+、CD19+和CD8a+细胞；ELISA测定脾细胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 2、CpG-ODN佐剂增强Hp疫苗的免疫保护效果研究：28只SPF级C57BL/6小鼠随机分成4组①PBS对照组；②WCS组；③WCS+ODN2088组；④WCS+ODN1826组。用WCS免疫小鼠,1W后加强免疫。末次免疫后4W采集小鼠血液，间接ELISA检测抗Hp抗体IgG、IgG1和IgG2a水平。用Hp菌液攻击小鼠，末次攻击4W后处死小鼠，胃组织Hp定量细菌培养评价Hp的定植水平；流式分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞、CD80+、CD19+和CD8a+细胞；并测定脾细胞上清IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平。 结果： 1、调节性T细胞对Hp疫苗免疫保护作用机制研究： 1、1疫苗免疫后，小鼠产生抗特异性抗体IgG，且WCS+anti-CD25组诱导IgG水平明显高于WCS组（P＜0.01），WCS+anti-CD25组小鼠血清IgG1，IgG2a也显著高于WCS组（P＜0.01），且血清IgG1，IgG2a滴度变化基本与IgG类似。 1、2流式细胞仪分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞，WCS+anti-CD25组低于WCS组（P＜0.01）；CD8a+细胞和CD80+细胞，WCS+anti-CD25组高于WCS组（P＜0.05）；CD19+细胞，WCS+anti-CD25组和WCS组无显著差异（P＞0.05）。 1、3WCS+anti-CD25组Hp定值密度低于WCS组（P＜0.01），提示WCS+anti-CD25组免疫小鼠抵抗Hp攻击效果优于WCS组。 1、4与WCS组比较，WCS+anti-CD25组脾细胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均显著增高（P＜0.01），说明去除Treg细胞有助于提高Th1和Th2类细胞因子的分泌水平。 2、CpG-ODN佐剂增强Hp疫苗的免疫保护效果： 2、1疫苗免疫后，小鼠产生抗特异性抗体IgG，且WCS+ODN1826组诱导IgG、IgG1，IgG2a显著高于WCS组（P＜0.01）。 2、2流式细胞仪分析脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞，WCS+ODN1826组低于WCS组（P＜0.01）；CD8a+细胞，WCS+ODN1826组高于WCS组（P＜0.01）；CD19+细胞和CD80+细胞，WCS+ODN1826组和WCS组无显著性差异（P＞0.05）。 2、3WCS+ODN1826组Hp定值密度低于WCS组（P＜0.01）。 2、4与WCS组比较，WCS+ODN1826组脾脏细胞上清分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-17水平均显著增高（P＜0.01）。 结论： 1、通过消减Treg细胞能显著增强Hp疫苗诱发的Th1和Th2混合的细胞免疫和体液免疫应答，以及增强CD8+T细胞的杀伤功能和抗原提呈细胞的递呈作用，从而增强Hp疫苗的免疫保护作用。 2、CpG-ODN通过激活TLR9信号通路，通过减少Treg细胞数量，逆转Treg细胞免疫抑制功能， CpG-ODN可能通过活化巨噬细胞、DC，促进IL-6分泌，间接抑制Treg的功能，产生偏向Th1型的免疫应答，从而增强Hp疫苗的免疫保护作用。
【关键词】：幽门螺杆菌 调节性T细胞 疫苗 佐剂 免疫保护
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：
- 英文缩略词表4-6
- 中文摘要6-9
- ABSTRACT9-12
- 第一部分 消减 Treg 细胞功能对增强幽门螺杆菌免疫保护作用机制研究12-33
- 前言12-14
- 材料与方法14-20
- 结果20-28
- 讨论28-33
- 第二部分 CpG-ODN 佐剂增强幽门螺杆菌疫苗的免疫保护作用初步研究33-50
- 前言33-34
- 材料与方法34-36
- 结果36-46
- 讨论46-50
- 全文结论50-51
- 参考文献51-57
- 综述57-65
- 参考文献62-65
- 致谢65
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