小鼠着床相关基因的筛选及其功能研究

发布时间：2021-07-27 10:22

　　胚泡着床是哺乳动物特有的生殖活动，是决定妊娠成功与否的关键步骤，因而是进行生殖调控的一个重要环节。胚泡着床是一个复杂的生理过程，涉及胚胎与母体子宫间极其复杂而精细的多因素协同作用，包括胚泡的发育、分化，子宫内膜的同步变化，以及子宫内膜与胚泡的相互作用。长期以来，胚泡着床的分子机制一直都是生殖生物学领域的一个研究热点，随着人们对细胞连接、信号转导、免疫调节等研究的不断深入，各类蛋白酶、细胞因子等非激素类分子在胚泡着床中的作用已得到广泛关注。近年来，国内外学者也纷纷运用不同的现代生物学技术，鉴别筛选到许多新的参与胚泡着床过程的非激素类分子，并对它们在着床中的作用机制进行了深入研究，使我们对着床的分子机制有了更全面的了解，但至今仍有许多问题有待于阐明。 以小鼠为动物模型，我们应用cDNA差减杂交方法鉴别筛选着床相关基因，即以孕4.5天小鼠着床部位（其中包括胚泡）cDNA RsaI片段为Tester，用过量的非着床部位和胚泡cDNA RsaI片段为Driver，通过差减杂交，构建差减库。并通过PCR扩增插入片段和Agarose 电泳的方法，进行克隆筛选，最后测序分析。共获得3个新的... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

第二次PCR扩增产物的Agarose电泳分析

图4 22个克隆的PCR产物Agarose电泳2-12，15-25，克隆编号 ；M = MspI 酶切的 pBR322 DNA 分子量标准性分析结果不同长度插入片段的克隆进行测序，与 GenBan比较，发现大部分的EST与已知基因的同源性很ST81 与已知的基因序列有一定的同源性，并将它 为含 EST8、EST60、EST73 和 EST81 的 pT-Agarose 电泳图。从图中可见相应的 EST 片段。G797175）片段长 149bp，与褐鼠白介素 3 调节的ulated by Interleukin 3,NFIL-3/Adenovirus E4P4）mRNA相比，可比的 147bp中有 131bp相同，5％，其余部分不可比[4]。EST60（BG797173）类

图1表达质粒pGEX- 4T-2/ISP2的构建图图2融合蛋白表达的SDS-PAGE分析1．蛋白质分子量标准；2．0.05mM IPTG 诱导表达的 ISP2/BL21 菌体裂解上清3．0.1mM IPTG 诱导表达的 ISP2/BL21 菌体裂解上清；kD


本文编号：3305598