Axin1在小鼠卵母细胞成熟中的作用

发布时间：2017-04-27 15:34

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【摘要】：哺乳动物的初级卵母细胞通过减数分裂而形成一个单倍体的卵子。卵母细胞的减数分裂过程有着严格精明的调控机制。Axin1是Wnt信号通路的一个负调控因子,是一个有多重功能的骨架蛋白,在有丝分裂过程中参与了中心体的分离、纺锤体组装等过程。但是Axin1在减数分裂中,特别是哺乳动物减数分裂中的作用目前还不是很清楚。本研究用小鼠卵母细胞为研究对象,对Axin1在哺乳动物减数分裂进程中的定位特点和功能进行了研究。首先采用免疫荧光检测了小鼠卵母细胞中的Axin1定位。Axin1在减数分裂过程中都定位在染色体周围。为了研究Axin1在卵母细胞发育过程中的生物学功能,我们采用了siRNA注射的方法降调Axin1的表达,通过Real time qPCR实验,结果显示Axin1具有较高的干涉效率。降调Axin1表达后,我们发现异常形态的纺锤体比例升高,主要为单极、多极及无极,还有拉长的纺锤体等；同时还发现染色体排列紊乱；第一极体排出率降低,以及MTOC相关蛋白y-tubulin从纺锤体两极脱落。并且小鼠卵母细胞减数分裂进程受到影响,纺锤体检验点蛋白试验发现Axin1降调后激活了纺锤体检验点蛋白的活性。通过以上研究得出,小鼠卵母细胞中的Axin1可能作为微管组织中心相关蛋白,调控着纺锤体组装和稳定以及纺锤体极的形成,和影响卵母细胞减数分裂进程。
【关键词】：Axin1 小鼠卵母细胞 减数分裂 纺锤体
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R321
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-24
• 第二章 材料与方法24-35
• 2.1 实验动物24
• 2.2 试剂与仪器24-26
• 2.2.1 药品与试剂24-26
• 2.2.2 主要仪器26
• 2.3 小鼠卵母细胞的获取及体外培养26-27
• 2.4 卵母细胞免疫荧光染色27-29
• 2.5 卵母细胞显微注射29-30
• 2.6 实时定量PCR实验30-34
• 2.6.1 卵母细胞总RNA的抽提30-32
• 2.6.2 总RNA的逆转录PCR反应32-33
• 2.6.3 Real time qPCR反应33-34
• 2.7 统计学分析34-35
• 第三章 实验结果35-42
• 3.1 小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中Axin1的定位35-36
• 3.2 Axin1 siRNA干涉效率验证36
• 3.3 降调Axin1会导致纺锤体组装和染色体排列不正常36-39
• 3.4 降调Axin1导致小鼠卵母细胞极体排放率下降39
• 3.5 降调Axin1的表达会导致γ-tubulin从纺锤体的两极脱落39-40
• 3.6 降调Axin1的表达激活纺锤体检验点活性40-42
• 第四章 讨论42-44
• 第五章 结论44-45
• 附录45-46
• 参考文献46-58
• 致谢58

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 黎梦溪;伍琼芳;;糖尿病影响女性卵巢功能的相关研究进展[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2013年05期

2 施颖芸;孙宜;万盛;丁之德;;糖尿病对生殖系统的影响[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2014年02期

3 祁慧霖;核微管组织中心的研究[J];实验生物学报;1988年01期

4 AKIRA SAWAGECHI,LAWRENCE BRAKO;Dynamic distribution of TTK in HeLa cells: insights from an ultrastructural study[J];Cell Research;2003年06期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 潘海;蛋白质二聚化和在纳米颗粒表面吸附去折叠的动力学研究[D];南京大学;2012年

2 仇剑波;禾谷镰孢菌β-微管蛋白基因定点突变及敲除对多菌灵敏感性和基因表达谱的影响[D];南京农业大学;2012年

3 杨尚武;Nek9和ERK8在小鼠卵母细胞成熟中的作用和在早期胚胎中定位[D];南方医科大学;2013年

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本文编号：330875