人灭活轮状病毒疫苗诱导实验动物免疫应答研究

发布时间：2017-04-29 06:14

  本文关键词：人灭活轮状病毒疫苗诱导实验动物免疫应答研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：轮状病毒(rotavirus, RV)是世界范围内引起婴幼儿感染性腹泻最主要的病原体之一,不论在发达国家还是发展中国家轮状病毒感染率均相似,全球每年约 有60万婴幼儿因感染RV而死亡,这些死亡病例中的80%发生在亚洲和非洲的发展中国家。然而目前尚无治疗RV腹泻的特效药物,采用疫苗预防轮状病毒感染、降低重症死亡率已成为有效手段。目前国内外市场上的RV疫苗均为口服减毒活疫苗,减毒活疫苗虽有良好的免疫效果,但疫苗使用过程中存在一些问题,例如毒力返祖、被外源因子污染等。研究和开发RV灭活疫苗(Inactivated rotavirus vaccine, IRV)可作为最大限度克服上述问题的一项重要策略和有效补充。但在不同国家和地区,轮状病毒流行株血清型不尽相同,疫苗免疫效果存在差异。因此,采用合适的地域性的病毒流行株进行疫苗开发,将会提高针对性和疫苗的有效性。 [目的]评价从流行地区分离的轮状病毒毒株生物学特性及在实验动物中的免疫原性。 [方法]用MA104细胞和Vero细胞分离病毒,基因测序确定其血清型,Q-FF、G-25离子交换层析和脱盐纯化,热结合甲醛灭活,用免疫胶体金法检测病毒抗原性,免疫荧光测定感染性滴度,PAGE胶检测遗传稳定性,电镜观察病毒形态。 灭活后的病毒稀释成不同抗原量(酶标单位：EU),与Al(OH)3佐剂混合制备成试验性疫苗。同时将小鼠分为对照组(注射缓冲液)、实验组。选择不同的免疫剂量即4EU、8EU、16EU、32EU、64EU、128EU免疫实验组。免疫途径为肌内注射,免疫三次,一次基础免疫,二次加强免疫,间隔两周。对照组则以相同途径免疫PBS和PBS+佐剂。两组均在每次免疫两周后,采用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体效价,FFA检测血清中和抗体效价,Western blot检测小鼠血清中的抗体特异性。 [结果]轮状病毒ZTR-68株在Vero细胞上连续传代后,细胞病变加快,抗原性逐渐增强；第7代达增殖高峰,病毒滴度达7.51gCCID50/mL;传代过程中,病毒基因组核酸带型保持一致；灭活后病毒经三代盲传未检测到残余活毒,抗原量可达12800EU/mL；免疫小鼠后,ELISA血清特异性IgG和中和抗体最高分别达1：3319和1：510,蛋白印迹可检测到特异性条带。 [结论]轮状病毒ZTR-68株能在Vero细胞上稳定增殖,病毒保持了毒株的基本生物学特性,且能诱导小鼠产生良好的免疫应答。
【关键词】：轮状病毒 分离培养 纯化 灭活 免疫应答
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-16
• 第一部分 人轮状病毒ZTR-68株灭活疫苗的制备及其评价16-36
• 一、实验材料与方法16-24
• 二、结果与分析24-32
• 三、讨论32-35
• 四、小结35-36
• 第二部分 轮状病毒ZTR-68株在小鼠中诱导的免疫应答36-49
• 一、实验材料与方法36-41
• 二、结果与分析41-46
• 三、讨论46-47
• 四、小结47-49
• 参考文献49-54
• 附录54-58
• 文献综述58-65
• 参考文献62-65
• 攻读学位期间发表文章情况65-66
• 致谢66-67

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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  本文关键词：人灭活轮状病毒疫苗诱导实验动物免疫应答研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：334359