淋巴细胞活化基因3（lag3）表达调控机制的研究

发布时间：2017-04-29 09:08

  本文关键词：淋巴细胞活化基因3（lag3）表达调控机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：淋巴细胞活化基因3 (lymphocyte-activation gene 3, lag3),又称CD223,是属于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily, IgSF)的细胞膜蛋白,其蛋白质结构与CD4分子非常相似,基因位置邻近CD4。早期研究显示,LAG3在人体内的表达局限于外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中的少数亚群上,如活化的T淋巴细胞和浆细胞样树突状细胞等。研究表明LAG3对T细胞功能的调节有重要作用,且与多种疾病状态下的免疫失调相关,但lag3基因表达调控的机制依然不明确。本文利用LAG3表达水平有差异的3个T细胞系(CEM, Jurkat E6-1, Jurkat ZM细胞系),对T细胞中lag3基因表达调控的部分机制进行了研究,并发现位于转录调控区中的CpG岛岸(CpG island shore)的DNA甲基化将抑制lag3基因的转录。首先,我们从mRNA和蛋白水平对实验室现有T细胞系的LAG3表达进行了检测,发现3个细胞系中LAG3表达有差异且受到转录水平调控。通过比对人与老鼠的基因组序列,鉴定到lag3启动子中存在两个潜在的保守调控区CR.A和CRB (conserved region AB)。利用DNase I高敏感位点的分析方法,我们发现在LAG3+的Jurkat E6-1细胞亚群中,CRA和CRB对DNase I的处理敏感。将包含CRA和CRB的lag3基因转录起始位点(transcription start site, TSS)上游片段扩增并构建报告质粒p.basic,发现该区段具有较高启动子活性。进一步,通过截断启动子发现CRB是该启动子区段中的核心序列,同时发现CRB在LAG3表达水平极低的CEM和Jurkat ZM细胞中亦具有高启动活性,提示我们这两种细胞内源的LAG3表达受到了表观遗传调控。接下来,我们利用Methprimer软件预测到了一个位于转录区域的CpG岛IS及其上游的位于CRB区的CpG岛岸,亚硫氰酸盐测序PCR (bisulfite sequencing PCR, BSP)检测表明：IS处于稳定的高度甲基化水平,而CpG岛岸的DNA甲基化水平与LAG3在3个T细胞系上的表达水平负相关。利用DNA甲基转移酶M.SssI将CRB体外甲基化可以显著降低其启动子活性,表明CRB甲基化对lag3基因转录具有抑制作用。此外,使用DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-dc处理LAG3表达水平低的CEM和JurkatZM细胞,发现两者的LAG3 mRNA和蛋白表达水平均得到一定程度的提升,同时观察到CRB甲基化水平的显著降低。为了确定CRB甲基化对人原代T细胞中lag3基因的调控作用,我们检测了原代T细胞的CRB甲基化,发现：相较于作为LAG3表达阴性对照的B淋巴细胞,原代CD8+T淋巴细胞的各记忆亚群上CRB的甲基化水平均低。综上,我们的数据表明：发生在CpG岛岸上的DNA甲基化对于人T细胞系中lag3基因转录而言是一种重要的表观遗传调节机制,而CRB的低甲基化水平可能将CD8+T细胞维持在适于LAG3快速表达的状态以应对活化信号并迅速终止CD8+T免疫应答。
【关键词】：lag3表达调控 DNA甲基化 亚硫氰酸盐测序 DNase Ⅰ高敏感位点 CD8~+T细胞
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-21
• 1 实验材料、试剂、仪器10-13
• 2 实验方法13-21
• 结果21-30
• 讨论30-32
• 结论32
• 创新性32-33
• 参考文献33-36
• 附录一 英文缩略词36-37
• 致谢37-39

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘涛;兰洋;吴传芳;;甲基化CpG结合结构域蛋白的原核表达及应用[J];四川大学学报(自然科学版);2014年02期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 罗双艳;MicroRNA-1246调控B细胞活化及其在系统性红斑狼疮发病中的作用[D];中南大学;2013年

2 靳玲侠;亚硫酸氢根诱导胞嘧啶及其衍生物水解去氨基机理的理论分析[D];陕西师范大学;2013年

3 李霞;组蛋白修饰和组蛋白变异体在转录调控中的作用机制研究[D];中国科学院北京基因组研究所;2014年

4 王春蕾;拟南芥中MBD7参与调控ROS1介导的DNA去甲基化机制的研究[D];中国农业大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 蔡剑锋;聚-ADP-核糖基化在六价铬致人支气管上皮细胞损伤中的作用[D];广西医科大学;2013年

2 胡渊;DRD5，，MNX1异常甲基化在2型糖尿病大血管并发症诊断中的应用研究[D];华中科技大学;2013年

3 丁冬林;染色体整合位点及组蛋白甲基化对HIV潜伏的影响[D];复旦大学;2011年

4 杨阳;原发性肝癌患者血清中CDO1基因启动子甲基化状态研究[D];山东大学;2014年

5 向忠军;基于甲基化修饰探讨加减养心通脉方对冠心病血瘀证及亚型CTNNB1、DES基因表达的影响研究[D];湖南中医药大学;2015年

  本文关键词：淋巴细胞活化基因3（lag3）表达调控机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：334577