云南马久邑、洱源日本血吸虫线粒体五个基因片段的研究

发布时间：2017-04-29 10:16

  本文关键词：云南马久邑、洱源日本血吸虫线粒体五个基因片段的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]研究云南马久邑、洱源两地的日本血吸虫(Schistosomajaponicum,S.j)线粒体cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五个基因片段差异,探讨日本血吸虫种内的遗传特点,为进一步阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构及生物学特性奠定基础。 [方法]1、获取虫体样品；a.马久邑血吸虫成虫：采集云南省马久邑市马久邑村的阳性钉螺,逸出尾蚴；用腹部贴片法感染昆明小鼠,每只小鼠感染20-30条,感染45天后进行剖杀；用灌注法取出小鼠体内的成虫；b.洱源血吸虫成虫：由云南省地方病防治研究所馈赠。用生理盐水将收集的新鲜虫体洗涤干净,用70%乙醇保存。2、虫体DNA提取及鉴定：分别取马久邑及洱源两地的日本血吸虫成虫各10条,用双蒸水反复吹打冲洗2次后,再用超纯水反复冲洗2-3次,分别置于一新的1.5m1的离心管中。用枪头将虫体磨碎,向离心管中加入180μl的Buffer GL、20μl Proteinase K及10μl RNase A酶消化过夜后,按TaKaRa MiniBest Universal Genomic DNA Extraction Kit说明书来提取基因组DNA,于紫外分光光度仪检测其纯度,最后于-20℃保存。3、PCR扩增、测序：以NC-002544为参考序列设计五对特异性引物,采用PCR技术对日本血吸虫线粒体cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五个基因片段进行扩增,于1.0%的琼脂糖凝胶电泳检测,并送华大基因科技服务有限公司进行测序。4、用DNAStar5.0和Mega6.0软件进行相似性分析和系统进化树构建。 [结果]1、经PCR扩增后分别获得云南马久邑、洱源两地的日本血吸虫线粒体cox2、cox3、nad3、nad5、atp6五个基因片段,长度分别为2301bp、270bp、301bp、209bp。2、经1%琼脂糖电泳标准分子量对照和测序鉴定,扩增获得的目的基因片段与预期结果相符。3、比对相似性分析：各序列有微小差异,分别有2、3、1、3、2个碱基位点不同,差异性分别为0.8%、1.2%、0.5%、0.8%、0.6%,即同源性分别为：99.2%、98.8%、99.5%、99.2%、99.4%。4、本研究的五个基因片段的系统进化树显示：云南马久邑、洱源两地的日本血吸虫聚集在一起,同曼氏血吸虫、马来血吸虫、湄公血吸虫、梭形血吸虫和埃及血吸虫有明显的分支,但是与GeneBank中已发表的其他地区品系的日本血吸虫线粒体相同序列比较并不能构成单独的分支。 [结论]1、云南马久邑、洱源两地不同自然隔离群的日本血吸虫线粒体cox2、cox3、 nad3、nad5、atp6五个基因片段均存在一定程度的种内差异(0.5%-1.2%),但差异较小,同源性较高。2、研究所选云南马久邑、洱源两地的血吸虫线粒体五个基因片段均属于日本血吸虫,且亲缘关系密切,无明显分支,尚不能构成种内分类；与马来血吸虫、湄公血吸虫、曼氏血吸虫、梭形血吸虫和埃及血吸虫有明显的分支。
【关键词】：日本血吸虫 线粒体基因cox2 cox3 nad3 nad5 atp6同源性分析系统进化树 马久邑 洱源
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R383.24;R3416
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 主要英文缩写10-12
• 引言12-17
• 材料与方法17-23
• 结果23-41
• 讨论41-46
• 结论46-47
• 参考文献47-51
• 综述51-60
• 参考文献56-60
• 攻读硕士期间发表论文情况60-61
• 致谢61

【参考文献】

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本文编号：334693